阿法骨化醇原料藥－阿法骨化醇－高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測定阿法骨化醇原料藥中阿法骨化醇的含量。

本方法適用于阿法骨化醇原料藥。

供試品經(jīng)流動相溶解并定量稀釋，加入內(nèi)標(biāo)后再經(jīng)流動相稀釋，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長265nm處檢測阿法骨化醇的峰面積，計(jì)算出其含量。

1. 乙酸乙酯

2. 石油醚（60~90℃)

3. 三氯甲烷

4. 地西泮

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按阿法骨化醇峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：乙酸乙酯 石油醚（60~90℃) 三氯甲烷=42 44 14

2.2 檢測波長：265nm

2.3 柱溫：室溫

1. 內(nèi)標(biāo)溶液的制備

精密稱取地西泮約15mg，置50mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，取2mL置100mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，即為內(nèi)標(biāo)溶液。

2. 對照品溶液的制備

精密稱取阿法骨化醇對照品適量，加流動相溶解并定量稀釋成每1mL中約含10µg的溶液，精密量取該溶液與內(nèi)標(biāo)溶液各5mL，置50mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。

3. 供試品溶液的制備

精密稱取供試品適量，加流動相溶解并定量稀釋成每1mL中約含10µg的溶液，精密量取該溶液與內(nèi)標(biāo)溶液各5mL，置50mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長265nm處測定阿法骨化醇（C₂₇H₄₄O₂)的峰面積，計(jì)算出其含量。

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005版，二部，p.295。