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醫(yī)學(xué)職稱論文范文賞析-探討動態(tài)觀察柴胡皂苷a對實(shí)驗(yàn)性癲癇小鼠癇性發(fā)作的影響
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探討動態(tài)觀察柴胡皂苷a對實(shí)驗(yàn)性癲癇小鼠癇性發(fā)作的影響-醫(yī),學(xué)全,在線.搜集.整理gydjdsj.org.cn
摘要:目的 研究柴胡皂苷a(saikosaponin a,SSa)對戊四氮(PTZ)誘導(dǎo)的小鼠癇性發(fā)作的影響，了解其藥效特點(diǎn)。 方法 采用PTZ誘導(dǎo)小鼠急性癇性發(fā)作來制作癲癇模型，通過記錄不同時間點(diǎn)小鼠癇性發(fā)作潛伏期和強(qiáng)直性驚厥率的變化，研究SSa抗小鼠PTZ致癇作用的動態(tài)特征。結(jié)果 SSa 腹腔注射30、60、90 min組能顯著延長陣發(fā)性痙攣潛伏期(P0.05)，其中SSa 90 min組作用最為顯著(P001)。在60、90、120 min組中，SSa 腹腔注射也能明顯延長強(qiáng)直性驚厥潛伏期(P0.05)，其中尤以90 min組作用顯著(P001); SSa 90 min組對過渡時間延長作用顯著(P0.05);SSa 30 min、60 min組能減少PTZ致癇小鼠強(qiáng)直性驚厥發(fā)作例數(shù)(P005)，且以SSa 60 min組作用最為顯著。結(jié)論 SSa具有對抗小鼠PTZ致癇作用;腹腔注射SSa對PTZ誘導(dǎo)小鼠的癇性發(fā)作在120 min內(nèi)以60 min、90 min藥效作用較強(qiáng)。
關(guān)鍵詞:實(shí)驗(yàn)性癲癇;柴胡皂苷 a; PTZ;小鼠
柴胡皂苷(saikosaponin)為中藥柴胡的主要成分之一，其單體成分之一的柴胡皂苷a(SSa)有降血脂、抗?jié)B出、抗肉芽腫和保護(hù)肝細(xì)胞等作用[1]，對于慢性腎病的治療也有較好療效[2，3]，但目前尚沒有SSa抗癲癇作用的報道。不過已有不少證據(jù)表明柴胡及柴胡總皂苷具有鎮(zhèn)靜和抗實(shí)驗(yàn)性癲癇的作用[4，5]。在柴胡皂苷單體各成分中，為明確何種皂苷單體具有抗癲癇作用，筆者研究了SSa對PTZ致癇小鼠癇性發(fā)作的影響，并探討SSa對癇性發(fā)作影響的不同時間的動態(tài)變化，以期了解SSa抗癲癇藥效作用的時間特點(diǎn)。
1 材 料
1.1 動物
健康昆明種小鼠180只，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g,由南方醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號為2004A063。
1.2 主要試劑
柴胡皂苷a購自上海醫(yī)藥工業(yè)研究所，批號050106;丙戊酸鈉(VPA)注射劑(德巴金)由杭州賽諾菲圣德拉保民生制藥有限公司生產(chǎn)，批號0402049。 戊四氮由美國Sigma公司生產(chǎn)，批號064k0686。
2 實(shí)驗(yàn)方法 1 實(shí)驗(yàn)動物分組
將180只昆明小鼠隨機(jī)分為9 組，每組20只，雌雄各半。A組:生理鹽水組(生理鹽水+ PTZ致癇)，作為以下各組的對照組;B、C、D、E組分別為經(jīng)SSa預(yù)處理30、60、90、120 min組(SSa 30 min、SSa 60 min、SSa 90 min、SSa 120 min + PTZ致癇);F、G、H、I組分別為經(jīng)VPA預(yù)處理30、60、90、120 min組(VPA 30 min、VPA60 min、VPA90 min、VPA120 min + PTZ致癇)。 2 模型制備及給藥方法
A組小鼠在腹腔內(nèi)注射生理鹽水(10 mL/kg)后30 min時腹腔注射PTZ(85 mg/kg)致癇;B、C、D、E組小鼠分別在腹腔注射SSa(7.24 mg/kg)后30、60、90、120 min時腹腔注射上述劑量的PTZ致癇;F、G、H、I組小鼠分別在腹腔注射VPA (200 mg/kg)后30、60、90、120 min時腹腔注射上述劑量的PTZ致癇。 3 觀察指標(biāo)
小鼠癇性發(fā)作分級采用Racine標(biāo)準(zhǔn)[4]。0級：無發(fā)作反應(yīng);1級：節(jié)律性口角、耳或面部肌肉抽動陣攣;2級：點(diǎn)頭并伴隨更嚴(yán)重的面部肌肉抽動陣攣;3級: 出現(xiàn)前肢陣攣但不伴隨直立;4級：前肢陣攣伴隨直立;5級：全身強(qiáng)直陣攣發(fā)作而跌倒。腹腔注射PTZ后立即觀察小鼠的行為動作，連續(xù)10 min，記錄小鼠癇性發(fā)作潛伏期，包括陣發(fā)性痙攣潛伏期(即從注射PTZ開始至相當(dāng)于1~3級發(fā)作的時間)、強(qiáng)直性驚厥潛伏期(即從注射PTZ開始至相當(dāng)于5級發(fā)作的時間)，計算由陣發(fā)性痙攣向強(qiáng)直性驚厥發(fā)作的過渡時間;并記錄發(fā)生強(qiáng)直性驚厥的例數(shù)，計算其發(fā)作率。 4 統(tǒng)計學(xué)處理-醫(yī) 學(xué)全,在線.搜集.整理gydjdsj.org.cn
應(yīng)用SPSS10.0軟件，多樣本均數(shù)的比較采用方差分析，計數(shù)資料及率的比較用卡方檢驗(yàn)，以P005為差異有顯著性。
3 結(jié) 果 1 SSa對PTZ致癇小鼠癇性發(fā)作潛伏期的動態(tài)影響
將對應(yīng)時間點(diǎn)SSa預(yù)處理、VPA預(yù)處理組與生理鹽水組比較，B、C、D、F、G、H各組陣發(fā)性痙攣潛伏期明顯延長，與A組比較差異有顯著性(P0.05)，其中尤以D、F、G組差異顯著(P0.01);C、D、E、F、H組強(qiáng)直性驚厥潛伏期同樣延長，與A組比較差異有顯著性(P0.05)，其中尤以D、F組差異顯著(P001);在過渡時間的比較中，D、F組與A組比較差異均有顯著性(P0.05)，其中尤以F組差異顯著(P0.01)。將對應(yīng)時間點(diǎn)的SSa組與VPA組比較，30 min時 SSa組對各潛伏期的延長作用不如VPA組(P001)，其余各時間點(diǎn)比較差異無顯著性。見表1。以上結(jié)果提示，SSa不僅能明顯延長陣發(fā)性痙攣潛伏期，而且能夠顯著延長強(qiáng)直性驚厥潛伏期及其過渡時間，其作用在60 min、90 min時強(qiáng)于30 min、120 min時，而VPA的作用以30 min和60 min強(qiáng)于90 min與120 min，可見SSa達(dá)到最佳作用的時間比VPA延后。表1 SSa對PTZ致癇小鼠癇性發(fā)作潛伏期的動態(tài)影響(略) 2 SSa對PTZ致癇小鼠強(qiáng)直性驚厥發(fā)作例數(shù)的動態(tài)影響
根據(jù)小鼠10 min內(nèi)在PTZ誘導(dǎo)下出現(xiàn)強(qiáng)直性驚厥的例數(shù)，將對應(yīng)時間點(diǎn)SSa預(yù)處理組、VPA預(yù)處理組與生理鹽水組比較，SSa與VPA預(yù)處理30 min、60 min組出現(xiàn)強(qiáng)直性驚厥例數(shù)與生理鹽水組比較差異有顯著性，其作用優(yōu)于90 min、120 min組。見表2。表2 SSa對PTZ致癇小鼠強(qiáng)直性驚厥發(fā)作例數(shù)的動態(tài)影響(略)
4 討 論
PTZ為很強(qiáng)的致癇劑，其致癇模型被認(rèn)為是理想的全身強(qiáng)直性驚厥發(fā)作模型之一,PTZ本身無特殊的神經(jīng)毒性作用[6],所以被廣泛應(yīng)用于癲癇發(fā)病機(jī)理的研究、抗癲癇藥物的篩選。當(dāng)PTZ誘發(fā)小鼠癲癇發(fā)生時，其癇性發(fā)作的特點(diǎn)是初期以陣攣性發(fā)作為主，很快以全身強(qiáng)直性驚厥發(fā)作為主要特點(diǎn)，根據(jù)其發(fā)作特點(diǎn)，在本研究中以這2種發(fā)作形式為指標(biāo)并結(jié)合目前公認(rèn)的Racine標(biāo)準(zhǔn)來分析其癇性行為。
VPA是臨床常用抗癲癇的主要藥物之一，有廣譜抗癲癇作用，對單純失神發(fā)作及全身強(qiáng)直陣攣(驚厥)發(fā)作療效最好，對單純及復(fù)雜部分性發(fā)作、肌陣攣性發(fā)作等也有良效。有文獻(xiàn)研究VPA在大鼠血清和腦脊液濃度變化時發(fā)現(xiàn)，腦脊液內(nèi)最高藥物濃度低于血清濃度，且其達(dá)到最高藥物濃度時間遲于血清藥物最高濃度，其半衰期約為60 min[7]。本研究也證實(shí)VPA既能延長陣發(fā)性痙攣、強(qiáng)直性驚厥的潛伏期，也能抑制強(qiáng)直性驚厥發(fā)作率，明顯減少驚厥發(fā)生例數(shù)，其作用以30 min和60 min時尤為明顯，與文獻(xiàn)報道一致。本研究結(jié)果顯示，SSa不僅能明顯延長小鼠陣發(fā)性痙攣的潛伏期，而且能夠顯著延長強(qiáng)直性驚厥的潛伏期及其過渡時間，能明顯減少小鼠發(fā)生強(qiáng)直性驚厥的例數(shù)，抑制驚厥發(fā)作率，其作用在60 min、90 min時較強(qiáng)。提示SSa具有較好的抗實(shí)驗(yàn)性癲癇作用，可能對肌陣攣性發(fā)作、全身強(qiáng)直陣攣發(fā)作有效。就本研究給出的劑量而言，30 min時 SSa對小鼠各潛伏期的延長作用不如VPA，但隨著時間的延長，SSa在60 min、90 min時對潛伏期的延長明顯，可能與SSa的起效作用較慢有關(guān)。至于SSa的代謝特點(diǎn)，有研究顯示其口服代謝時與消化道的菌群有密切關(guān)系[8]，其代謝呈現(xiàn)時間依賴性，早期有學(xué)者將其在體外胃液及腸道細(xì)菌共同培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)SSa在3 h內(nèi)完全被代謝，而轉(zhuǎn)化為其他類型的皂苷或苷元[9]。
但SSa在血清及腦脊液中的變化情況如何，其代謝與藥效作用是否相關(guān)，以及SSa能否在更長的時間內(nèi)維持其作用，還有待進(jìn)一步研究。
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