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1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 臨床資料
連續(xù)收集胃鏡下活檢組織，由有經(jīng)驗(yàn)的消化科醫(yī)師在胃鏡下取材，同時(shí)進(jìn)行組織學(xué)檢查，依據(jù)組織學(xué)檢查結(jié)果收集淺表性胃炎、萎縮性胃炎和胃潰瘍各40例，取健康成年人并經(jīng)病理檢查無(wú)炎癥活動(dòng)及Hp感染的正常胃黏膜25例。其中男78例，女62例。年齡19～72歲，平均年齡41歲。所有受試者在檢查前2周內(nèi)未服用過(guò)質(zhì)子泵抑制劑、鉍劑及抗生素，無(wú)服用其他藥物史，肝腎功能均正常。慢性胃炎在炎癥明顯處和胃竇、胃體各取材1塊，胃潰瘍?cè)谄溥吘壓臀父]、胃體各取材1塊，立即投入40g/L多聚甲醛中固定。
1.1.2 Hp根治治療
方案為奧美拉唑20mg、阿莫西林1.0g、替硝唑1.0g，均每天2次，療程7d。停藥4周后復(fù)查14C呼氣試驗(yàn)，陰性者判定為Hp根除，并同時(shí)采集胃黏膜組織做MIF檢測(cè)。
1.1.3 試劑
兔抗人MIF多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruze公司，SP9001免疫組織化學(xué)染色試劑盒及DAB顯色試劑盒購(gòu)自廣州中杉金橋，Warthinstarry銀染色試劑為實(shí)驗(yàn)室自配。
1.2 方法
1.2.1 免疫組織化學(xué)法
PBS代替一抗做陰性對(duì)照，已經(jīng)確診的肺腺癌做陽(yáng)性對(duì)照，將甲醛固定的組織經(jīng)過(guò)常規(guī)脫水、浸蠟、包埋后切片，厚度為4μm，切片經(jīng)常規(guī)脫蠟水化，高壓抗原修復(fù)，加100mL/L H2O2以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，加封閉用正常山羊血清工作液，加一抗(濃度1∶400)，于4℃冰箱中過(guò)夜，加生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG，加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，DAB顯色劑顯色，蘇木素復(fù)染，MIF在細(xì)胞漿中表達(dá)，陽(yáng)性呈棕黃色。
1.2.2 結(jié)果判斷
參照AXIOTIS等[4]標(biāo)準(zhǔn)，由兩位病理醫(yī)生采用盲法(獨(dú)立檢測(cè)) 在高倍鏡(×400)下讀片。每張切片隨機(jī)觀察10個(gè)不重復(fù)的視野(不足10個(gè)視野的，按實(shí)際觀察到的視野計(jì)數(shù))，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞占同類細(xì)胞總數(shù)的百分率及細(xì)胞染色強(qiáng)度綜合判定。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：不著色為0分，淺粉色或黃色為1分，粉色或棕黃色為2分，紅色或黃褐色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞所占整張片比例評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%為0分，10%～40%為1分，41%～70%為2分，>70%為3分。兩種評(píng)分相加，0～1分為(-)，2分為弱陽(yáng)性(+)，3～4分為陽(yáng)性()，5～6分為強(qiáng)陽(yáng)性()�！�2分的定為陰性，>2分的定為陽(yáng)性醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站gydjdsj.org.cn。
1.2.3 Warthinstarry銀染色法檢測(cè)Hp
切片經(jīng)常規(guī)脫蠟至水，放入10g/L AgNO3水溶液，60℃避光浸染60min，完成染色后傾去浸銀液，用雙蒸水涮洗。顯影工作液配制后即刻(1min內(nèi))倒入裝有切片的玻璃皿中，室溫下避光染色2～4min，顯影至切片組織呈棕褐色，立即棄去顯影液，流水沖洗停止顯影過(guò)程，切片常規(guī)脫水至透明，光學(xué)樹(shù)脂封片，Hp在鏡下可見(jiàn)在金黃色的組織背景中，呈清晰黑色短棒狀或S狀。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理，各組間對(duì)照采用四格表資料的Pearson卡方檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
