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1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動物 健康雄性Wistar大鼠14只，平均體重(25±20)g，購自鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。自由飲水、進(jìn)食，室溫25.2 ℃，分籠飼養(yǎng)。
1.2 動物模型的制備 大鼠于術(shù)前12 h禁食，自由飲水。采用文獻(xiàn)方法制作大鼠肢體缺血再灌注模型，沿大鼠雙后肢根部用止血帶結(jié)扎，完全阻斷血流;阻斷4 h后松解止血帶，恢復(fù)雙后肢血流。自大鼠腹主動脈放血處死動物，血液用做檢測血液流變學(xué)指標(biāo)及血漿P選擇素和細(xì)胞間粘附分子1(intracellular adhension molecule1, ICAM1)濃度。
1.3 動物分組 實(shí)驗(yàn)大鼠14只，隨機(jī)分為2組，阿加曲班組和對照組，每組7只。阿加曲班組缺血4 h，于再灌注前30 min給予阿加曲班5 mg/kg 腹腔注射。對照組大鼠單純肢體缺血4 h后再灌注，再灌注前30 min給予等量0.9%氯化鈉溶液，腹腔內(nèi)注射。2組動物均于再灌注2 h后采血觀察指標(biāo)。
1.4 血液流變學(xué)指標(biāo)測定 應(yīng)用SA6000全自動血流變檢測儀測定血漿粘度(ηp)、全血低切還原粘度(Lηre,1/s)、全血高切還原粘度(Hηre, 200/s)、紅細(xì)胞比容(Hct)、紅細(xì)胞聚集指數(shù)(EAI)、血沉方程K值(ESRK)、紅細(xì)胞剛性指數(shù)(TK)、紅細(xì)胞變形指數(shù)(EDI)。
1.5 ELISA法測定血漿P選擇素、ICAM1濃度 血標(biāo)本均置于含抗凝劑EDTA的試管中，3 000 r/min離心15 min，-70℃冰箱內(nèi)保存。樣本統(tǒng)一測定，嚴(yán)格按照試劑盒說明操作。ELISA試劑盒購自天津?yàn)笊镏破饭尽?/P>
1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 2組血液流變學(xué)指標(biāo)比較 阿加曲班組ηp、Hηre、Lηre、EAI和TK顯著低于對照組(P<0.05)，EDI高于對照組(P<0.05)，2組Hct和ESRK差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。表3 2組血液流變學(xué)指標(biāo)比較注：與對照組比較，^P<0.05
2.2 2組血漿P選擇素濃度和ICAM1濃度比較 阿加曲班組血漿P選擇素和ICAM1濃度低于對照組(P<0.05)。見表4。表4 2組血漿P選擇素濃度和ICAM1濃度比較注：與對照組比較,^P<0.01
3 討論
缺血再灌注損傷的發(fā)生機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜，活性氧代謝產(chǎn)物、鈣超載、微循環(huán)障礙、血液流變性改變和凝血酶的激活等是導(dǎo)致該損傷的主要機(jī)制[5] 。在缺血再灌注時(shí)，機(jī)體的凝血活性增強(qiáng)主要是由于內(nèi)皮細(xì)胞的直接損傷和各種細(xì)胞因子促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)各種粘附分子，例如E選擇素、P選擇素和ICAM1[6];內(nèi)皮損傷使內(nèi)皮下的組織因子入血，另一方面，單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞生成組織因子增加[7]。粘附分子和組織因子分別從內(nèi)源性途徑和外源性途徑激活了凝血系統(tǒng)，其后果是使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白，甚至導(dǎo)致微循環(huán)中廣泛的微血栓形成醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站gydjdsj.org.cn。
微血栓的形成會增加血粘度，堵塞微血管，進(jìn)一步加重微循環(huán)障礙和血液流變性異常。更重要的是，凝血過程會通過多種炎癥發(fā)展，比如活化因子Ⅹ(FⅩa)可以誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子和粘附分子[8]。更能把凝血過程和炎癥過程緊密地聯(lián)系在一起的是凝血酶(因子Ⅱa)，體外試驗(yàn)顯示它能誘導(dǎo)單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞趨化[9]，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)粘附分子，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞粘附[10]。凝血酶還能強(qiáng)力激活血小板，并促進(jìn)血小板介導(dǎo)的中性粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間的粘附[11]。體內(nèi)體外試驗(yàn)均表明，F(xiàn)Ⅹa和凝血酶還能促進(jìn)中性粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子[12]。
微循環(huán)障礙、血液流變性改變和凝血系統(tǒng)的激活，三者互為因果，相互影響，從而形成惡性循環(huán)，導(dǎo)致微循環(huán)缺血、瘀血、無復(fù)流，直接影響組織、器官的血液灌注和代謝，加重缺血再灌注損傷。
阿加曲班是化學(xué)合成的低分子藥物,直接與凝血酶的催化活性位點(diǎn)結(jié)合,滅活凝血酶。由于阿加曲班分子量小,它能進(jìn)入到血栓內(nèi)部,直接滅活已經(jīng)與纖維蛋白結(jié)合的凝血酶。其作用特點(diǎn)為: (1)直接滅活凝血酶(因子Ⅱa)的活性[13],其作用不依賴于抗凝血酶; (2)不但滅活液相凝血酶,還能夠滅活與纖維蛋白血栓結(jié)合了的凝血酶; (3)阻斷凝血瀑布的正反饋,間接抑制凝血酶的產(chǎn)生; (4)治療劑量下對血小板功能無影響,不導(dǎo)致血小板減少癥;(5)具有良好的劑量-反應(yīng)關(guān)系,效果和安全性可以預(yù)測;(6)與活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)或者活化凝血時(shí)間(ACT)相關(guān)性良好。阿加曲班可通過抑制凝血酶催化或介導(dǎo)的反應(yīng)并且激活天然的抗凝劑蛋白C從而發(fā)揮其藥理學(xué)作用[14]。阿加曲班在體外就能降低血粘度，并且呈現(xiàn)S曲線，有劑量依賴效應(yīng)[15]。
