藥物分析-授課教案:第二章藥物的鑒別試驗

基本內容

注解（進展、輔助

手段和時間分配)

一、 概 述

依據(jù)藥典進行的藥物分析主要有三大項：鑒別、檢查和含量測定。

藥物的鑒別試驗（identification test)是用于鑒別藥物的真?zhèn)�，在藥物分析中屬首項工作，只有證實被分析的藥物是真的，才有必要接著進行檢查、含量測定。

 藥典所收載的藥物項下的鑒別試驗方法，僅適用于貯藏在有標簽容器中的藥物，用以證實是否為其所標示的藥物。它與分析化學中的定性鑒別有所區(qū)別。這些試驗方法不能賴以鑒別未知物。

原料藥：鑒別試驗結合性狀項下的外觀和物理常數(shù)進行確證。

二、鑒別的項目

（一)性狀 藥物的性狀反映了藥物特有的物理性質，一般包括外觀、嗅、味、溶解度以及物理常數(shù)等。

（二)一般鑒別試驗（general identification test)

 *以藥物的化學結構及其物理化學性質為依據(jù)，通過化學反應來鑒別藥物真?zhèn)蔚摹?/p>

 *無機藥物：根據(jù)其組成的陰離子和陽離子的特殊反應，并以藥典附錄III項下的一般鑒別試驗為依據(jù)。 *有機藥物：采用典型的官

能團反應。

*一般鑒別試驗的項目： 丙二酰脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類、有機氟化物類、無機金屬鹽類（鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、鈣鹽、鋇鹽、銨鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋁鹽、鋅鹽、銅鹽、銀鹽、汞鹽、鉍鹽、銻鹽、亞錫鹽)、有機酸鹽（水楊酸鹽、枸櫞酸鹽、乳酸鹽、苯甲酸鹽、酒石酸鹽)、無機酸鹽（亞硫酸鹽或亞硫酸氫鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、硼酸鹽、碳酸鹽與碳酸氫鹽、醋酸鹽、磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物)。

*一般鑒別試驗僅供確認單一的化學藥物，如為數(shù)種化學藥物的混合物或有干擾物質存在時，除另有規(guī)定外，應不適用。

*通過一般鑒別試驗只能證實是某一類藥物，而不能證實是哪一種藥物。

1.有機氟化物

(1)．鑒別試驗 取供試品約7mg，照氧瓶燃燒法（附錄VII　C)進行有機破壞，用水20ml與0.01mol/L氫氧化鈉溶液6.5ml為吸收液，俟燃燒完全后，充分振搖；取吸收液2ml，加茜素氟藍試液0.5ml，再加12%醋酸鈉的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀釋至4ml，加硝酸亞鈰試液0.5ml，即顯藍紫色；同時做空白對照試驗。

(2)．試驗原理 有機氟化物經(jīng)氧瓶燃燒法破壞，為堿性溶液吸收成為無機氟化物后，與茜素氟藍、硝酸亞鈰形成藍紫色絡合物。 　

復習舊課（3min)

引入新課（2min)

5min

20min

50mi

例如，經(jīng)一般鑒別反應的鈉鹽試驗，證實某一藥物為鈉鹽，但不能辨認是氯化鈉、苯甲酸鈉或者是其它某一種鈉鹽藥物。要想最后證實被鑒別的物質到底是哪一種藥物，必須在一般鑒別試驗的基礎上，再進行專屬鑒別試驗，方可確認。

基本內容

注解（進展、輔助

手段和時間分配)

2.有機酸鹽

(1).水楊酸鹽

鑒別試驗一  取供試品的稀溶液，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫色。

原理 本品在中性或弱酸性條件下，和三氯化鐵試液生成配位化合物，在中性時呈紅色，弱酸性時呈紫色；若在強酸性中，配位化合物分解生成游離水楊酸。 　　

本反應極為靈敏，只需取稀溶液進行試驗，如取用量大，產(chǎn)生顏色過深時，可加水稀釋后觀察。 　　

鑒別試驗二   取供試品溶液，加稀鹽酸，即析出白色水楊酸沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液中溶解。

原理  水楊酸不溶于水（0℃時溶解度為1g/1500L)，故供試液加酸即析出游離水楊酸。由于水楊酸的酸性（K＝1.06×10^-3，25℃)大于醋酸（K＝1.85×10^-5，25℃)，故能與醋酸銨作用釋出醋酸，而本身形成銨鹽溶解。析出的水楊酸亦可經(jīng)冷水洗滌、干燥后測定熔點（158℃-161℃)。

(2)．苯甲酸鹽 3．乳酸鹽 4．枸櫞酸鹽 5．酒石酸鹽 6．醋酸鹽

鑒別試驗 取供試品，加硫酸和乙醇后加熱，即產(chǎn)生乙酸乙酯的香氣。

3.無機金屬鹽

(1)．鈉鹽

鑒別試驗  取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色。

原理 鈉的火焰光譜在可見光區(qū)，有589.0nm、589.6nm主要譜線，故其燃燒火焰顯黃色。

本焰色反應極為靈敏（最低檢出限量為0.1ng鈉離子)。因此，對所用儀器和試劑要求必須很嚴格。在檢測前應將鉑絲燒紅，趁熱浸入鹽酸中，如此反復數(shù)次，直至火焰不染黃色后，再蘸取供試品進行測定。只有當強烈的黃色火焰持續(xù)數(shù)秒鐘不退，才能確認為鈉鹽。

(2)．鉀鹽 　　

鑒別試液   焰色反應顯紫色，但有少量鈉鹽混存時，須隔色玻璃透視，方能辨認。

原理 鉀的火焰光譜在可見光區(qū)有766.49nm、769.90nm與404.4nm幾條譜線，其中以766.49nm與769.90nm兩條譜線最強。由于人眼在此波長附近敏感度較差，故鉀鹽的燃燒火焰顯紫色。如有鈉鹽混存，因鈉焰靈敏度很高，需透過藍色鈷玻璃將鈉焰黃色濾去，此時火焰顯粉紅色。

(3)．鈣鹽

鑒別試驗一 焰色反應顯磚紅色（622nm)。、

基本內容

注解（進展、輔助

手段和時間分配)

 (4)．銨鹽

鑒別試驗  取供試品，加過量氫氧化鈉試液后，加熱，即分解，發(fā)生氨臭；遇濕潤的紅色石蕊試紙，能使之變藍，并能使硝酸亞汞試液濕潤的濾紙顯黑色。

原理  其反應式為：　

4.無機酸根

（1)氯化物

鑒別一　

　如供試品為生物堿或其他有機堿的鹽酸鹽，須先加氨試液使成堿性，將析出的沉淀濾過除去，取濾液進行試驗。

鑒別二

能使?jié)駶櫟牡饣��?a class="channel_keylink" href="http://gydjdsj.org.cn/mingzu/2009/20090512114713_152891.shtml" target="_blank">淀粉試紙顯藍色。

（2)硫酸鹽

　鑒別一　取供試品溶液，加氯化鋇試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。

　鑒別二　取供試品溶液，加醋酸鉛試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液或氫氧化鈉試液中溶解。

（三)專屬鑒別試驗（specific identification test)

*根據(jù)每一種藥物化學結構的差異及其所引起的物理化學特性的不同，選用某些特有的靈敏定性反應，來鑒別藥物真?zhèn)蔚�。是證實某一種藥物的依據(jù)。

綜上所述，一般鑒別試驗是以某些類別藥物的共同化學結構為依據(jù)，根據(jù)其相同的物理化學性質進行藥物真?zhèn)蔚蔫b別，以區(qū)別不同類別www.med126.com的藥物。而專屬鑒別試驗，則是在一般鑒別試驗的基礎上，利用各種藥物的化學結構差異，來鑒別藥物，以區(qū)別同類藥物或具有相同化學結構部分的各個藥物單體，達到最終確證藥物真?zhèn)蔚哪康摹?/p>

20min

基本內容

注解（進展、輔助

手段和時間分配)

三、鑒別方法

（一)化學鑒別法

1．干法　將供試品加適當試劑在規(guī)定的溫度條件下（一般是高溫)進行試驗，觀測此時所發(fā)生的特異現(xiàn)象。

(1)焰色試驗:常用干法，利用某些元素所具有的特異焰色，可鑒別它們?yōu)槟囊活慃}類藥物。

方法為：取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，使火焰顯出特殊的顏色。

(2)加熱分解:在適當?shù)臏囟葪l件下，加熱使供試品分解，生成有特殊氣味的氣體。

2．濕法 系指將供試品和試劑在適當?shù)娜軇┲�，于一定條件下進行反應，發(fā)生易于觀測的化學變化，如顏色、沉淀、氣體、熒光等。

(1)呈色反應鑒別法：系指供試品溶液中加入適當?shù)脑噭┤芤�，在一定條件下進行反應，生成易于觀測的有色產(chǎn)物。在鑒別試驗中最為常用的反應類型有： 1)三氯化鐵呈色反應---酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基； 2)異羥肟酸鐵反應---多為芳酸及其酯類、酰胺類； 3)茚三酮呈色反應---脂肪氨基； 4)重氮化-偶合顯色反應---芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯www.med126.com氨基； 5)氧化還原顯色反應及其它顏色反應。

 （2)沉淀生成反應鑒別法：常用的這類反應有：１)與重金屬離子的沉淀反應　在一定條件下，藥物和重金屬離子反應，生成不同形式的沉淀； 2)與硫氰化鉻銨（雷氏鹽)的沉淀反應　多為生物堿及其鹽，具有芳香環(huán)的有機堿及其鹽； 3)其它沉淀反應。

（3)熒光反應鑒別法：常用的熒光發(fā)射形式有以下類型： 1)藥物本身可在可見光下發(fā)射熒光； 2)藥物溶液加硫酸使呈酸性后，在可見光下發(fā)射熒光； 3)藥物和溴反應后，于可見光下發(fā)射出熒光； 4)藥物和間苯二酚反應后，發(fā)射出熒光及藥物經(jīng)其它反應后，發(fā)射熒光。

(4)氣體生成反應鑒別法： 1)大多數(shù)的胺（銨)類藥物、酰脲類藥物以及某些酰胺類藥物，可經(jīng)強堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨（胺)氣； 2)化學結構中含硫的藥物，可經(jīng)強酸處理后，加熱，發(fā)生硫化氫氣體； 3)含碘有機藥物經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣；含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生乙酸乙酯的香味。

（二)光譜鑒別法

1．紫外光譜鑒別法 常用的方法有： 1)標準品對照法； 2)規(guī)定吸收波長法； 3)規(guī)定吸收波長和相應的吸收度法； 4)規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法； 5)規(guī)定吸收波長和吸收度比值法。

 2．紅外光譜鑒別法 紅外光譜法是一種專屬性很強、應用較廣（固體、液體、氣體樣品)的鑒別方法。

1. 標準圖譜對照法：中國藥典（2005年版)和BP
2. 對照品法：USP。

10min

30min

基本內容

注解（進展、輔助

手段和時間分配)

（三) X射線粉末衍射法

X射線(倫琴射線)

  波長為0.01～1(3)nm

   當X射線投身到晶體上時，各原子對入射X射線發(fā)生相干散射，干涉的結果可以使散射的X射線的強度增強或減弱發(fā)生相長干涉產(chǎn)生的X射線稱為X射線的衍射線。

—布拉格公式

20min

基本內容

注解（進展、輔助

手段和時間分配)

  （四)色譜鑒別法 利用不同物質在不同色譜條件下，產(chǎn)生各自的特征色譜行為（Rf值或保留時間)進行鑒別試驗。常用的方法有：

1.薄層色譜鑒別法 在實際工作中，一般采用對照品（或標準品)比較法，要求供試品斑點的Rf值應與對照品斑點一致。

2.高效液相色譜鑒別法 一般規(guī)定按供試品含量測定項下的高效液相色譜條件進行試驗。要求供試品和對照品色譜峰的保留時間應一致。含量測定方法為內標法時，可要求供試品溶液和對照品溶液色譜圖中藥物峰保留時間與內標物峰的保留時間比值應相同。

3.氣相色譜鑒別法 方法同高效液相色譜法。

4.紙色譜鑒別法 紙色譜法存在分離效能低、分析時間長等缺點，在藥物鑒別試驗中逐漸被薄層色譜法所取代。

15min

基本內容

注解（進展、輔助

手段和時間分配)

   四、鑒別試驗條件

（一)供試液濃度

（二)反應溫度

（三)供試液pH值

（四)反應時間

（五)防止干擾

15min

問題討論(5min)；

作業(yè)和習題布置2(min)；

歸納總結(3min)

小 結

1.從鑒別的意義、判斷藥物真?zhèn)�，引出藥物鑒別的重要性

2.講清藥典規(guī)定藥物鑒別的項目，鑒別試驗的條件及靈敏度的意義

復習思考題

或

作 業(yè) 題

1.簡述鑒別試驗的定義。

2.影響鑒別試驗的因素有哪些？

3.常用的鑒別方法有哪些？

4.一般鑒別試驗和專屬鑒別試驗。

教 學 效 果

與 分 析

1.結合已學分析化學知識，啟發(fā)學生總結出藥物的一般鑒別方法。

2.運用無機化學、有機化學知識，講解各類有機物、無機物的鑒別

試驗及原理。效果較好。