實習十六 血紅蛋白測定
一、目的要求
(一)掌握血紅蛋白測定的方法。
(二)熟記其正常值及其臨床意義。
二、見習方法
(—)輔導教師講解操作方法及示范。
(二)學生分組練習。
三、見習用具：
白工作衣自備。
血紅蛋白吸管、光度計、紅細胞計算盤、蓋玻片、稀釋液、試管等由實驗至準備。
四、見習內(nèi)容
(一)吸血練習：
1、取抗凝血一大滴，置于玻片上。
2、用右手拇指及中指握持血紅蛋白吸管帶氣囊端，練習以食指頭靈活控制氣囊。
3、吸血恰到所需之刻度處。如稍多少許，可用干棉球回吸調(diào)準，再將血液吹出。注意避免混入氣泡。如用力過大，血液吸至氣囊內(nèi)，要重新洗滌吸管再行吸血。
4、吸管洗滌：以生理鹽水洗滌吸洗數(shù)次，用后棉花球堵住吸管嘴反復按氣囊吹干數(shù)次，即可繼續(xù)使用。
5、以上步驟反練習至熟練掌握。
(二)血紅蛋白測定
紅蛋白 (Hemoglobin，簡稱Hb)測定
一、氰化高鐵血紅蛋白(HicN法)
原理
全血加HicN試劑，除Hbs外其它血紅蛋白衍生物均能轉(zhuǎn)化成穩(wěn)定的棕紅色氰化高鐵血紅蛋白。在分光光度計540nm處比色測定，根據(jù)標準讀數(shù)和標本讀數(shù)計算其濃度。
試劑
HicN標準液：(齊文氏) 商品試劑
操作
1、取血20μl加到5ml HicN試醫(yī)學全在線劑中，充分混和，靜置5分鐘。
2、分光光度計(帶寬應小于8nm)，波長540nm處，光戲(比色杯內(nèi)徑1.000cm，以HicN試劑或蒸餾水液為空白，測定吸光度(A)。
計算
血紅蛋白(g/L)=測定管吸光度××251
=測定管吸光度×367.7
式中：
①64458是目前國際公認的血紅蛋白平均分子量。
②44000是1965年國際血液學標準化委員會(ICSH)公布的血紅蛋白摩爾吸光度。
③251是稀釋倍數(shù)。
由于儀器的差異，性能不一，仍以采用HicN參考標準液繪制標準曲線的方法為妥，以血紅蛋白參考值gydjdsj.org.cn/yishi/為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪制曲線，實際應用比較方便。
注意事項
1、血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中，KCN為劇毒藥品。
2、下列因素可引起血紅蛋白假性增高：脂血癥、血液濃縮、白細胞>30000/μl。重癥黃疸、嚴重的血管內(nèi)溶血等。
