作者單位：深圳市橫崗人民醫(yī)院，廣東 深圳 518115
【摘要】 目的：探討慢性乙型肝炎患者外周血Th細(xì)胞凋亡信號(hào)蛋白的表達(dá)情況及臨床意義。方法：提取35例慢性乙型肝炎患者和35例健康人外周血單核細(xì)胞，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析慢性乙型肝炎患者外周血Th細(xì)胞凋亡信號(hào)蛋白Fas、FasL和Bcl2表達(dá)情況。結(jié)果：慢性乙肝患者Th細(xì)胞Fas、FasL表達(dá)明顯高于健康對(duì)照組（P<0.05)，但Bcl2表達(dá)在兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05)。結(jié)論：外周血Th細(xì)胞凋亡異�？赡芘c慢性乙型肝炎患者細(xì)胞免疫效應(yīng)低下及疾病發(fā)展相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】 慢性乙型肝炎；輔助性T細(xì)胞；凋亡蛋白
Analysis and clinical significance of expression of apoptotic related proteins on peripheral blood Th cell in chronic hepatitis B patients
LUO Zujun,LI Yanhua
The People’s Hospital of Henggang,Shenzhen，Guangdong 518115，China
Abstract： Objective To explore the expression of apoptotic related protein on peripheral blood Th cells in chronic hepatitis B and evaluate its clinical significance. Methods Peripheral blood monocytes were separated from 35 healthy persons and 35 patients with chronic hepatitis B and its apoptotic related proteins Fas, FasL and Bcl2 were detected by FCM. Results The expression of Fas, FasL on Th in chronic hepatitis B patients is higher than that on healthy controls（P<0.05), while the difference of Bcl2 between patients and controls is no statistic significance（P>0.05).Conclusion The high expression of apoptotic related protein Fas, FasL on Th in chronic hepatitis B patients enhances the apoptosis of Th cells,which leads to lower cell immunity function and negative progress of patients.
Key words： Chronic hepatitis B; Th cell; Apoptosis proteins
乙型肝炎是一種免疫相關(guān)性疾病，HBV感染機(jī)體后并不直接對(duì)肝細(xì)胞造成損傷，是通過(guò)誘發(fā)機(jī)體免疫效應(yīng)間接損傷肝細(xì)胞。同時(shí)，乙肝病毒得以清除，這種免疫反應(yīng)要是通過(guò)淋巴細(xì)胞亞群的改變，CD4+T細(xì)胞數(shù)量和功能的改變是其中重要的環(huán)節(jié)［1］。本文通過(guò)檢測(cè)慢性乙肝患者CD4+T細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況，探討慢性乙肝患者細(xì)胞免疫功能狀態(tài)，分析它們?cè)诼訦BV發(fā)病中的臨床意義。
1 資料與方法
1.1 病例資料
35例慢性乙型肝炎均為我院2006年7月至2007年5月間收治的患者，年齡18歲～62歲，平均年齡42歲，其中男性18例，女性17例。根據(jù)2000年第十次全國(guó)病毒性肝炎會(huì)議標(biāo)準(zhǔn)診斷［2］。對(duì)照組為健康人，年齡17歲～65歲，平均年齡43歲，其中男性20例，女性15例。
1.2 主要試劑及儀器
淋巴細(xì)胞分離液購(gòu)于AXISSHIED公司、流式細(xì)胞儀為Beckman EPICSXL型，PECD4抗體購(gòu)自BD公司,FasFITC、FasLFITC和 Bcl2FITC抗體 購(gòu)自Santa Cruz公司。
1.3 方法
無(wú)菌采集患者和健康人外周靜脈血5 ml，肝素抗凝，以淋巴細(xì)胞分離液分離得淋巴細(xì)胞，溶血素溶解細(xì)胞，經(jīng)T細(xì)胞分離富聚柱得純化的T細(xì)胞，然后用PBS洗滌并調(diào)整至1×106/ ml，分別加入FasFITC/CD4PE, FasLFITC/CD4PE和Bcl2FITC/CD4PE兩組單抗，放置30 min后，上流式細(xì)胞儀，分析每管10 000個(gè)細(xì)胞，小鼠抗人單克隆IgG1FITC作為陰性對(duì)照管，得出Fas、 FasL和Bcl2蛋白表達(dá)的百分率。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
全部數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，計(jì)算各組均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，用±s表示，組間差異用t檢驗(yàn)分析。
2 結(jié)果
由下表可見，慢性乙型肝炎CD4+T細(xì)胞Fas、FasL與健康對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)，而慢性乙型肝炎患者CD4+T細(xì)胞Bcl2表達(dá)與健康對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05)。表1 慢性乙型肝炎患者Th細(xì)胞Fas、FasL和Bcl2表達(dá)情況（略)注：與健康對(duì)照比較*P＜0.05;△P＞0.05。
3 討論
慢性乙型肝炎是臨床常見病，目前認(rèn)為其與宿主機(jī)體免疫狀態(tài)特別是細(xì)胞免疫功能失調(diào)密切相關(guān)［3］。CD4+T細(xì)胞主要代表輔助性T細(xì)胞(Th細(xì)胞),它對(duì)B細(xì)胞、細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL)及其他免疫細(xì)胞的增殖和分化具有促進(jìn)作用。有研究表明，慢性乙肝患者外周血CD4+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)和相對(duì)數(shù)（CD4+/CD8+)都明顯降低［4］，這意味著CD4+T數(shù)量和質(zhì)量的異常在慢性乙型肝炎進(jìn)展中起重要的作用。www.med126.comFasL是表達(dá)于活化免疫細(xì)胞的膜分子，它與相應(yīng)受體結(jié)合，通過(guò)FasFasL信號(hào)途徑可介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而Bcl2是體內(nèi)重要的抗凋亡蛋白分子，能阻斷凋亡信號(hào)傳遞的最后通路而抑制凋亡。所以，這兩種凋亡蛋白表達(dá)在一定程度上調(diào)節(jié)體內(nèi)CD4+T細(xì)胞的數(shù)量和功能，但是該蛋白在慢性HBV患者體內(nèi)的表達(dá)情況尚未完全明確。
我們研究結(jié)果顯示慢性乙肝患者CD4+T細(xì)胞表面Fas、FasL的表達(dá)顯著高于健康人群，而Bcl2在兩組間差異無(wú)顯著性。這可能是由于乙肝患者體內(nèi)活化的CD4+T細(xì)胞增多，細(xì)胞免疫活性上調(diào)，但免疫效應(yīng)的結(jié)果是在清除病毒感染的同時(shí)，通過(guò)FasFasL途徑誘導(dǎo)Th細(xì)胞凋亡，也就是活化誘導(dǎo)凋亡（AICD)方式，促使患者免疫調(diào)節(jié)失衡，細(xì)胞免疫紊亂，這或許是慢性乙肝患者CD4+T細(xì)胞數(shù)量下降的潛在機(jī)制。
FasL是T細(xì)胞活化的標(biāo)志之一，因此Th細(xì)胞表面FasL的表達(dá)可能與慢性HBV的病情密切相關(guān)。在慢性HBV患者外周血CD4+T細(xì)胞表面FasL表達(dá)量和細(xì)胞數(shù)量結(jié)合起來(lái)可能有如下幾點(diǎn)臨床意義：細(xì)胞數(shù)量正常，F(xiàn)asL表達(dá)量上升表明機(jī)體針對(duì)乙肝病毒免疫力增強(qiáng)，病情較輕；細(xì)胞數(shù)量下降而FasL表達(dá)量增加，表明機(jī)體免疫系統(tǒng)在對(duì)乙肝病毒實(shí)行細(xì)胞免疫同時(shí)，引起自身凋亡，導(dǎo)致效應(yīng)細(xì)胞數(shù)量減少；細(xì)胞數(shù)量和FasL表達(dá)量均下降，說(shuō)明效應(yīng)細(xì)胞數(shù)減少且細(xì)胞免疫功能低下，病情有可能惡化［5］。
因此，我們可以通過(guò)檢測(cè)慢性HBV患者外周血CD4+T細(xì)胞的數(shù)量及其凋亡相關(guān)蛋白Fas/FasL的表達(dá)來(lái)預(yù)測(cè)病情的發(fā)展，為臨床診斷與治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
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