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免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)常用試劑介紹

 

  四、粘附劑

  在免疫細(xì)胞化學(xué)工作中,由于標(biāo)本(如切片)的脫落常影響工作的質(zhì)量的速度,故粘附劑的選擇和使用就顯得較為重要。

  1.鉻礬明膠液

  試劑:鉻礬        0.5g

  明膠(Gelatine)     5g

  H2O           ~1000ml

  方法:在1000ml的燒杯或燒瓶中,以500~800ml H2O加溫溶解明膠,待其完全溶解后,再加入鉻礬。注意溫度過(guò)高易使明膠燒糊,包被玻片時(shí)最好控制水溫在70℃。如有明顯殘?jiān)^(guò)濾后使用。

  2.甲醛-明膠液

  試劑:40%甲醛      2.5ml

  明膠          0.5g

  蒸餾水         至100ml

  配制方法:用少許蒸餾水(約80ml)加熱溶解明膠,待完全溶化后,加入甲醛,最后補(bǔ)充蒸餾水至100ml混勻即可。

  3.多聚賴氨酸(Poly-L-Lycine,PLL)

  試劑:多聚賴氧酸      5g

  蒸餾水           ~1000ml

  配制方法:稱取PLL,溶于H2O,充分混合即可,此液濃度為0.5%,可適當(dāng)稀釋配成0.01~0.5%濃度。4℃保存,也可-20℃?zhèn)溆。PLL可反復(fù)冰凍,效果無(wú)明顯影響,工作液常再稀釋10~50倍。

  4.Vectabond試劑  該試劑是Vector公司新進(jìn)推出的一種新型玻片粘附劑。該試劑與一般的粘附劑不同,它是通過(guò)對(duì)玻璃表面起化學(xué)修飾作用,改變其表面的化學(xué)物理特性,使組織切片牢固地貼于玻璃片上,貼上后不易脫落,保留時(shí)間較久。一個(gè)試劑盒(7ml)可配成350ml工作液(用丙酮配)。處理載玻片前(事先酸處理),用染色缸裝好各種液體,按下列程序進(jìn)行:

  干凈載玻片→丙酮5min→Vectabond試劑工作液(7ml Vectabond+ 350ml丙酮):將載玻片用鑷子夾住浸入Vectabond試劑1~2次→dH2O,2×5min→干燥(37℃過(guò)夜)→用鋁箔包好,室溫存放備用。

  注意:避免污染(塵埃等)。

  綜上述方法處理的載片一般可存放半年以上。

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