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免疫熒光細(xì)胞化學(xué)熒光顯微鏡檢查法

 

 。ǘ)濾色系統(tǒng)

  濾色系統(tǒng)是熒光顯微鏡的重要部位,由激發(fā)濾板和壓制濾板組成。濾板型號,各廠家名稱常不統(tǒng)一。濾板一般都以基本色調(diào)命名,前面字母代表色調(diào),后面字母代表玻璃,數(shù)字代表型號特點(diǎn)。如德國產(chǎn)品(Schott)BG12,就是種藍(lán)色玻璃,B是藍(lán)色的第一個字母,G是玻璃的第一個字母;我國產(chǎn)品的名稱已統(tǒng)一用拼音字母表示,如相當(dāng)于BG12的藍(lán)色濾板名為QB24,Q是青色(藍(lán)色)拼音的第一個字母,B是玻璃拼音的第一個字母。不過有的濾板也可以透光分界濾長命名,如K530,就是表示壓制濾長530nm以下的光而透過530nm以上的光。還有的廠家的濾板完全以數(shù)字命名,如美國Corning廠的NO:5-58,即相當(dāng)于BG12。

  用于熒光顯微鏡的主要濾板如表3-1。

表3-1 熒光顯微鏡常用濾板型號和透光特點(diǎn)

基本色調(diào) 相應(yīng)名稱 2mm厚透光范圍(峰值)nm
上海電器元件廠 德國(Schott) 蘇聯(lián) 日本
黑紫 ZWB-1 UG-1 yΦC-2 DV-1 300~400(365)
黑紫 ZWB-2 UG-5 yΦC-1   280~240(360)
靛藍(lán) ZB-2 BG-1 ΦC-1 BG-1 300~500(380)
靛藍(lán) ZB-3 BG-3 CC-4 BG-3 260~520(400)
靛藍(lán) QB-24 BG-12 CC-8 BG-12 310~570(420)
淡藍(lán) QB-10 BG-38 C3C-5   310~720(460)
  QB-12   -8    
      -11    
橙黃 CB-3 OG-1(K530) OC-11 OG-1 530以上
橙黃 JB-8 OG-4(K510) ЖC-18 FY-5 510以上
綠橙 JB-7 GG-11(K490) ЖC-17 FY-3 480以上
        FY-4  
淡綠 JB-4 GG-3(K430) жC-11 US-10 420以上

  引自:五九一節(jié) 五部隊(duì)編:熒光顯微術(shù),見參考資料)

  1.激發(fā)濾板  根據(jù)光源和熒光色素的特點(diǎn),可選用以下三類激發(fā)濾板,提供一定波長范圍的激發(fā)光。

  紫外光激發(fā)濾板:此濾板可使400nm以下的紫外光透過,阻擋400nm以上的可見光通過。常用型號為UG-1或UG-5,外加一塊BG-38,以除去紅色尾波。

  紫外藍(lán)光激發(fā)濾板:此濾板可使300~450nm范圍內(nèi)的光通過。常用型號為ZB-2或ZB-3,外加BG-38。

  紫藍(lán)光激發(fā)濾板:它可使350~490nm的光通過。常用型號為QB24(BG12)。

  最大吸收峰在500nm以上者的熒光素(如羅達(dá)明色素)可用藍(lán)綠濾板(如B-7)激發(fā)。

  近年開始采用金屬膜干涉濾板,由于針對性強(qiáng),波長適當(dāng),因而激發(fā)效果比較玻璃濾更好。如西德Leitz廠的FITC專用KP490濾板和羅達(dá)明的S546綠色濾板,均遠(yuǎn)比玻璃濾板效果好。

  激發(fā)濾板分薄厚兩種,一般暗視野選用薄濾板,亮視野熒光顯微鏡可選用厚一些。基本要求是以獲得最明亮的熒光和最好的背景為準(zhǔn)。

  2.壓制濾板 壓制濾板的作用是完全阻擋激發(fā)光通過,提供相應(yīng)濾長范圍的熒光。與激發(fā)濾板相對應(yīng),常用以下3種壓制濾板:

  紫外光壓制濾板:可通過可見光、阻擋紫外光通過。能與UG-1或UG-5組合。常用GG-3K430或GG-6K460。

  紫藍(lán)光壓制濾板:能通過510nm以上濾長的熒光(綠到紅),能與BG-12組合。通常用OG-4K510或OG-1K530。

  紫外紫光壓制濾板:能通過460nm以上波長的熒光(藍(lán)到紅),可與BG-3組合,常用OG-11K470AK 490,K510。

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