一)根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離
。1)結(jié)晶及重結(jié)晶方法
判斷結(jié)晶純度的方法有:
a.晶型均一,色澤均勻醫(yī)。學(xué)教育網(wǎng)原創(chuàng)。
b.有一定的熔點(diǎn)和較小的溶距,熔距應(yīng)在2℃以?xún)?nèi)。
c.TLC或PC分別用三種以上溶劑系統(tǒng)檢識(shí),呈現(xiàn)單一圓整斑點(diǎn)。
d.HPLC或GC檢查呈現(xiàn)單峰。 www.med126.com
(2)沉淀法
水提醇沉法(除去多糖或蛋白質(zhì))
醇提水沉法(除去樹(shù)脂或葉綠素)
醇提乙醚沉淀或丙酮沉淀法(使皂甙沉淀析出)
。3)pH法
酸提堿沉法(使生物堿類(lèi)成分沉淀)
堿提酸沉法(使黃酮、蒽醌等成分沉淀)
等電點(diǎn)法(使蛋白質(zhì)沉淀)
。4)鹽類(lèi)沉淀法:
(二)根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離
1.液-液萃取與分配系數(shù)K值
2.分離難易與分離因子β
3.分配比與pH
4.紙色譜
5.分配柱色譜
。ㄈ)根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進(jìn)行分離
1.物理吸附基本規(guī)律—相似者易于吸附
。1)對(duì)極性物質(zhì)具有較強(qiáng)的親和能力。故極性強(qiáng)的溶質(zhì)將被優(yōu)先吸附。
。2)溶劑極性越弱,則吸附劑對(duì)溶質(zhì)的吸附能力越強(qiáng)。溶劑極性增強(qiáng),則吸附劑對(duì)溶質(zhì)的吸附能力減弱。
(3)溶質(zhì)即使被硅膠、氧化鋁吸附,但加入極性較強(qiáng)的溶劑時(shí),又可被后者置換洗脫出來(lái)。
活性炭因?yàn)槭欠菢O性吸附劑,故與硅膠、氧化鋁相反。
2.極性及其強(qiáng)弱判斷
。1)官能團(tuán)的極性強(qiáng)弱按下列表達(dá)順序排列:
RCOOH > Ar-OH >>、RNHR > RC=O > R-O-R > RH(2)化合物的極性由分子中所含官能團(tuán)決定。
3.吸附色譜法應(yīng)用
。1)硅膠、氧化鋁吸附柱色譜過(guò)程中,吸附劑的用量一般為樣品量的30-60倍。樣品極性較小、難以分離者,吸附劑用量可適當(dāng)提高至樣品量的100-200倍。
。2)硅膠、氧化鋁吸附柱色譜,應(yīng)盡可能選用極性小的溶劑裝柱和溶解樣品,以利于樣品在吸附劑柱上形成狹窄的原始譜帶。 醫(yī)學(xué)全.在線.網(wǎng).站.提供
(3)洗脫所用溶劑的極性宜逐步增加。
。4)為避免發(fā)生化學(xué)吸附,酸性物質(zhì)宜用硅膠,堿性物質(zhì)則宜用氧化鋁進(jìn)行分離。
4.聚酰胺吸附色譜法
。1)聚酰胺的性質(zhì)及吸附原理
、 形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目越多,吸附能力越強(qiáng)。
② 成鍵位置對(duì)吸附力也有影響。易形成分于內(nèi)氫鍵者,其在聚酰胺上的吸附相對(duì)減弱。
、 分子中芳香化程度高者,則吸附性增強(qiáng);反之,則減弱。
一般情況下,各種溶劑在聚酸胺柱上的洗脫能力由弱至強(qiáng),可大致排列成下列順序;水→甲醇→丙酮→氫氧化鈉水溶液→甲酰胺→二甲基甲酰胺→尿素水溶液
。2)聚酰胺色譜的應(yīng)用
5.大孔吸附樹(shù)脂
。1)大孔吸附樹(shù)脂的吸附原理
大孔吸附樹(shù)脂是吸附性和分子篩性原理相結(jié)合的分子材料。吸附性是由于范德華引力或產(chǎn)生氫鍵的結(jié)果,分子篩性是由于其本身多孔性結(jié)構(gòu)所決定的。
(2)影響吸附的因素
大孔吸附樹(shù)脂本身的性質(zhì)、溶劑的性質(zhì)和化合物的性質(zhì)是影響吸附的3個(gè)重要因素。
。3)大孔吸附樹(shù)脂的應(yīng)用
苷與糖類(lèi)的分離,生物堿的精制,多糖、黃酮、三萜類(lèi)化合物的分離。
。4)洗脫液的選擇
洗脫液可使用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。
。ㄋ)根據(jù)物質(zhì)分子大小進(jìn)行分離
物質(zhì)分子大小不同的化合物可用透析法、凝膠過(guò)濾法、超濾法、超速離心法等分離。
1.凝膠過(guò)濾法
凝膠的種類(lèi):常用的有葡聚糖凝膠(Sepadex-G)醫(yī).學(xué).全.在線.網(wǎng).站.提供以及羥丙基葡聚糖凝膠(Sephadex-LH-20)。
2.膜過(guò)濾法
膜過(guò)濾法主要包括滲透、反滲透、超濾、電滲析、透析、液膜技術(shù)等。透析法多用于水溶性的大分子和小分子物質(zhì)的分離,如蛋白質(zhì)、酶、多糖分離過(guò)程中的脫鹽。按照孔徑大小,可將透析膜分為:微濾膜、超濾膜、反滲透膜、納米膜。
(五)根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進(jìn)行分離
離子交換樹(shù)脂的種類(lèi):陽(yáng)離子(強(qiáng)酸型和弱酸型)交換樹(shù)脂和陰離子(強(qiáng)堿型和弱堿型)交換樹(shù)脂。