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  藥物分析西藥分析—玻璃酸酶測(cè)定法           ★★★ 【字體:

玻璃酸酶測(cè)定法,執(zhí)業(yè)藥師考試網(wǎng)輔導(dǎo)藥物分析西藥分析

來(lái)源:醫(yī)學(xué)全在線 更新:2007-5-17 考研論壇
試劑
  (1) 醋酸-醋酸鉀緩沖液
  取醋酸鉀14g與冰醋酸20.5ml,加水使成1000ml。
  (2) 磷酸鹽緩沖液
  取磷酸二氫鈉2.5g、無(wú)水磷酸氫二鈉1.0g與氯化鈉8.2g,加水使成1000ml。
  (3) 水解明膠
  取明膠50g,加水1000ml,在121℃加熱90分鐘,然后冷凍干燥。
  (4) 水解明膠稀釋液
  取磷酸鹽緩沖液與水各250ml,加水解明膠330mg,搖勻,在0~4℃保存。如溶液不發(fā)生渾濁,可繼續(xù)使用。
  (5) 血清貯備液
  取新鮮牛血清或凍干牛血清(先用水溶解并稀釋至標(biāo)示量體積)1份,加醋酸-醋酸鉀緩沖液9份稀釋?zhuān)僖?mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.1,放置18~24小時(shí)后再用。在0~4℃保存,可應(yīng)用30日。
  (6) 血清溶液醫(yī)學(xué)全.在.線網(wǎng)站gydjdsj.org.cn
  血清貯備液中血清總固體(取牛血清適量,置裝有潔凈砂粒并在105℃干燥至恒重的坩堝中,置水浴上蒸干后,再在105℃干燥至恒重)在8%左右者,取1份,用醋酸-醋酸鉀緩沖液3份稀釋?zhuān)谎蹇偣腆w在5%左右者,取1份,用醋酸-醋酸鉀緩沖液2份稀釋?zhuān)慌R用時(shí)配制。
  (7) 玻璃酸鉀貯備液
  取預(yù)先經(jīng)五氧化二磷減壓干燥48小時(shí)的玻璃酸鉀,加水制成每1ml中含0.5mg的溶液。在0℃以下保存,可應(yīng)用30日。
  (8) 玻璃酸鉀溶液 取玻璃酸鉀貯備液1份,用磷酸鹽緩沖液1份稀釋。臨用時(shí)配制。
  標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備
  取玻璃酸酶標(biāo)準(zhǔn)品適量,精密稱定,加冷的水解明膠稀釋液制成每1ml中含1.5單位的溶液。臨用時(shí)配制。
  供試品溶液的制備
  按估計(jì)單位精密稱取供試品適量,加冷的水解明膠稀釋液制成每1ml中含1.5單位的溶液。臨用時(shí)配制。
  標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備醫(yī)學(xué)全在線www.med126.com
  取大小相同的試管12支,按順序加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.00、0.10、0.20、0.30、0.40與0.50ml,每份2支;再依次相應(yīng)加入水解明膠稀釋液0.50、 0.40、0.30、0.20、0.10與0.00ml,每隔30秒鐘順序加入玻璃酸鉀溶液0.50ml,使每一管的總體積為1.00ml,搖勻,置37 ±0.5水浴中;每管準(zhǔn)確保溫30分鐘后,每間隔30秒鐘順序取出,立即順序加入血清溶液4.0ml, 搖勻,在室溫放置30分鐘,搖勻,在640nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度;同時(shí)以磷酸鹽緩沖液0.50ml代替玻璃酸鉀溶液,加水解明膠稀釋液0.50ml,搖勻,按上述方法自 “置37±0.5℃的水浴中”起同樣操作,作為空白。以吸收度為縱座標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品溶液的單位數(shù)為橫座標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
  測(cè)定法
  取大小相同的試管6支,依次加供試品溶液0.20、0.30與0.40ml,每份2支;再依次相應(yīng)加入水解明膠稀釋液0.30、0.20與 0.10ml,照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下,自“每隔30秒鐘順序加入玻璃酸鉀溶液0.50ml”起,依法測(cè)定,自標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得單位數(shù)后,分別除以供試品的重量(mg), 算出6份供試品的平均數(shù),即為玻璃酸酶的效價(jià)單位。
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文章錄入:凌云    責(zé)任編輯:凌云 
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