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三、瓊脂糖凝膠電泳法
1.儀器裝置
電泳室及直流電源同紙電泳。
2.試劑
(1) 醋酸－鋰鹽緩沖液(pH3.0)
取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氫氧化鋰調(diào)節(jié)pH至3.0，再加水至1000ml。
(2) 甲苯胺藍溶液
取甲苯胺藍0.1g，加水100ml使溶解。
3.操作法
(1)制膠
取瓊脂糖約0.2g，加水10ml，置水浴中加熱使溶脹完全,加溫熱的醋酸－鋰鹽緩沖液(pH3.0)10ml，混勻，趁熱將膠液涂布于大小適宜(2.5cm×7.5cm或4cm×9cm)的玻璃板上，厚度約3mm，靜置，待凝膠結成無氣泡的均勻薄層，即得。
(2) 標準品溶液及供試品溶液的制備
照各藥品項下規(guī)定配制。
(3) 點樣與電泳
在電泳槽內(nèi)加入醋酸－鋰鹽緩沖液(pH3.0),將凝膠板置于電泳槽架上，經(jīng)濾紙橋浸入緩沖液。于凝膠板負極端分別點樣1μl，立即接通電源，在電壓梯度約30V/cm，電流強度1～2mA/cm的條件下，電泳約20分鐘，關閉電源。
(4) 染色與脫色
取下凝膠板，用甲苯胺藍溶液染色，用水洗去多余的染色液至背景無色為止。
四、聚丙烯酰胺凝膠電泳法
1.儀器裝置
通常由穩(wěn)流電泳儀和圓盤或平板電泳槽組成。其電泳室有上、下兩槽,每個槽中都有固定的鉑電極，鉑電極經(jīng)隔離電線接于電泳儀穩(wěn)流擋上。
2.試劑
(1)溶液A
取三羥甲基氨基甲烷36.6g，四甲基乙二胺0.23ml,加0.1mol/L鹽酸溶液48ml，再加水溶解并稀釋至100ml,置棕色瓶內(nèi)，在冰箱中保存。醫(yī)學全.在線gydjdsj.org.cn
(2)溶液B
取丙烯酰胺30.0g、次甲基雙丙烯酰胺0.74g，加水溶解并稀釋至100ml,濾過，置棕色瓶內(nèi)，在冰箱中保存。
(3)電極緩沖液(pH8.3)
取三羥甲基氨基甲烷6g、甘氨酸28.8g,加水溶解并稀釋至1000ml，置冰箱中保存，用前稀釋10倍。
(4)溴酚藍指示液
取溴酚藍0.1g,加0.05mol/L氫氧化鈉溶液3.0ml與90％乙醇5ml,微熱使溶解，加20％乙醇制成250ml。
(5)染色液
取0.25％(W/V)考馬斯亮藍G<[250]>溶液2.5ml，加12.5％(W/V)三氯醋酸溶液至10ml。
(6)稀染色液
取上述染色液2ml，加12.5％(W/V)三氯醋酸溶液至10ml。
(7)脫色液
7％醋酸溶液。
3.操作法
(1)制膠
取溶液A2ml，溶液B5.4ml，加尿素2.9g使溶解，再加水4ml，混勻，抽氣趕去溶液中氣泡，加0.56％過硫酸銨溶液2ml，混勻制成膠液，立即用裝有長針頭的注射器或細滴管將膠液沿管壁加至底端有橡皮塞的小玻璃管(10×0.5cm)中,使膠層高度達6～7cm, 然后徐徐滴加水少量，使覆蓋膠面，管底氣泡必須趕走，靜置約30分鐘，待出現(xiàn)明顯界面時即聚合完畢，吸去水層。
(2)標準品溶液及供試品溶液的制備
照各藥品項下的規(guī)定。
(3)電泳
將已制好的凝膠玻璃管裝入圓盤電泳槽內(nèi)，每管加供試品或標準品溶液50～100μl，為防止擴散可加甘油或40％蔗糖溶液1～2滴及0.04％溴酚藍指示液1滴,也可直接在上槽緩沖液中加0.04％溴酚藍指示液數(shù)滴，玻璃管的上部用電極緩沖液充滿，上端接負極、下端接正極。調(diào)節(jié)起始電流使每管為1mA，數(shù)分鐘后，加大電流使每管為2～3mA，當溴酚藍指示液移至距玻璃管底部1cm處，關閉電源。
(4)染色和脫色
電泳完畢，用裝有長針頭并吸滿水的注射器,自膠管底部沿膠管壁將水壓入，膠條即從管內(nèi)滑出，將膠條浸入稀染色液過夜或用染色液浸泡10～30分鐘，以水漂洗干凈，再用脫色液脫色至無蛋白區(qū)帶凝膠的底色透明為止。
(5)結果判斷
將膠條置燈下觀察，根據(jù)供試品與標準品的色帶位置和色澤深淺程度進行判斷。
相對遷移率 供試品和標準品的電泳區(qū)帶有時可用相對遷移率(R''<[m]>)進行比較。其計算式如下：
進膠端到供試品或標準品區(qū)帶的距離
相對遷移率(R''<[m]>)＝─────────────────
進膠端到溴酚藍區(qū)帶的距離
掃描
將清晰的膠條置雙波長薄層掃描儀或凝膠電泳掃描儀中掃描并積分，由各組分的峰面積計算百分含量。
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