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維生素A測定法,藥物分析輔導(dǎo)西藥分析 | |||||
| 來源：醫(yī)學(xué)全在線 更新：2007-5-16 考研論壇 | |||||
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由于維生素A制劑中含有稀釋用油和維生素A原料藥中混有其他雜質(zhì)，所測得的吸收度不是維生素A獨有的吸收。在以下規(guī)定的條件下，非維生素A物質(zhì)的無關(guān)吸收所引入的誤差可以用校正公式校正，以便得到正確結(jié)果。 校正公式系采用三點法，除其中一點是在吸收峰波長處測得外，其他兩點分別在吸收峰兩側(cè)的波長處測定，因此儀器波長若不夠準確時，即會有較大誤差，故在測定前，應(yīng)校正儀器波長。 測定應(yīng)在半暗室中盡速進行。 合成維生素A和天然魚肝油中的維生素A是酯式維生素A。如供試品中干擾測定的雜質(zhì)較少，能符合下列第一法測定的規(guī)定時，可直接用溶劑溶解供試品后測定；否則應(yīng)按第二法，經(jīng)皂化提取，除去干擾后測定。 第一法醫(yī).學(xué).全.在.線www.med126.com 取供試品適量，精密稱定，加環(huán)己烷溶解并定量稀釋制成每1ml中含9～15單位的溶液，照分光光度法（附錄Ⅳ Ａ）,測定其吸收峰的波長，并在下列各波長處測定吸收度，計算各吸收度與波長328nm處吸收度的比值和波長328nm處的E1％ 1cm值。 波長, nm 吸收度比值 波長, nm 吸收度比值 300 0.555 340 0.811 316 0.907 360 0.299 328 1.000 如果吸收峰波長在326～329nm之間，且所測得各波長吸收度比值不超過上表中規(guī)定的±0.02，可用下式計算含量： 每1g供試品中含有的維生素A的單位＝E1％ 1cm(328nm)×1900 如果吸收峰波長在326～329nm之間，但所測得的各波長吸收度比值超過表中規(guī)定值的±0.02，應(yīng)按下式求出校正后的吸收度，然后再計算含量。 A<[328]>(校正)＝3.52(2A<[328]>－A<[316]>－A<[340]>) 如果校正吸收度與未校正吸收度相差不超過±3.0％,則不用校正吸收度，仍以未經(jīng)校正的吸收度計算含量。 如果校正吸收度與未校正吸收度相差在－15％至－3％之間,則以校正吸收度計算含量。 如果校正吸收度超過未校正吸收度的-15％或+3％,或者吸收峰波長不在326～329nm之間，則供試品須按下述第二法測定。醫(yī)學(xué)全在.線gydjdsj.org.cn 第二法 精密稱取供試品適量(約相當于維生素A總量500單位以上,重量不多于2g),置皂化瓶中，加乙醇30ml與50％(g/g)氫氧化鉀溶液3ml，置水浴中煮沸回流30分鐘，冷卻后，自冷凝管頂端加水10ml沖洗冷凝管內(nèi)部，將皂化液移至分液漏斗中（分液漏斗活塞涂以甘油淀粉潤滑劑）,皂化瓶用水 60～100ml分數(shù)次洗滌，洗液并入分液漏斗中，用不含過氧化物的乙醚振搖提取4次，每次振搖約5分鐘，第一次60ml，以后各次40ml，合并乙醚液，用水洗滌數(shù)次，每次約100ml，洗滌應(yīng)緩緩旋動，避免乳化,直至水層遇酚酞指示液不再顯紅色，乙醚液用鋪有脫脂棉與無水硫酸鈉的濾器濾過，濾器用乙醚洗滌，洗液與乙醚液合并，放入250ml量瓶中，用乙醚稀釋至刻度，搖勻；精密量取適量,置蒸發(fā)皿內(nèi),在水浴上低溫蒸發(fā)至5ml后，置減壓干燥器中，抽干，迅速加異丙醇溶解并定量稀釋制成每1ml中含維生素A9～15單位，照分光光度法(附錄Ⅳ Ａ),在300、310、325與334nm四個波長處測定吸收度，并測定吸收峰的波長。吸收峰的波長應(yīng)在323～327nm之間，且300nm波長處的吸收度與325nm波長處的吸收度的比值應(yīng)不超過0.73，按下式計算校正吸收度。 A<[325]>(校正)＝6.815A<[325]>－2.555A<[310]>－4.260A<[334]> 每1g供試品中含有的維生素A的單位＝E1％ 1cm(325nm,校正)×1830 如果校正吸收度在未校正吸收度的±3％以內(nèi),則仍以未經(jīng)校正的吸收度計算含量。 如果吸收峰的波長不在323～327nm之間，或300nm波長處的吸收度與325nm波長處的吸收度的比值超過0.73，則應(yīng)自上述皂化后的乙醚提取液250ml中，另精密量取適量(相當于維生素A300～400單位)，減壓蒸去乙醚至約剩5ml，再在氮氣流下吹干,立即精密加入甲醇3ml，溶解后，精密量取500μl，注入維生素D測定法（附錄Ⅶ K）第二法項下的凈化用色譜柱系統(tǒng)，準確收集含有維生素A的流出液，在氮氣流下吹干,而后照上述方法自“迅速加異丙醇溶解”起，依法操作并計算含量。 【附注】 �。�1）甘油淀粉潤滑劑 取甘油22g，加入可溶性淀粉9g, 加熱至140℃,保持30分鐘并不斷攪拌，放冷，即得。 （2）不含過氧化物的乙醚 照麻醉乙醚項下的過氧化物檢查，如不合于規(guī)定,可用5％硫代硫酸鈉溶液振搖，靜置，分取乙醚層，再用水振搖洗滌1次，重蒸,棄去首尾5％部分，餾出的乙醚再檢查過氧化物，應(yīng)符合規(guī)定。 |
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