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藥物分析西藥分析—熒光分析法

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【字體：小大】

藥物分析西藥分析—熒光分析法

來源：醫(yī)學(xué)全在線更新：2007-5-16 考研論壇

某些物質(zhì)受紫外光或可見光照射激發(fā)后能發(fā)射出比激發(fā)光波長較長的熒光。物質(zhì)的激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜，可以用作該物質(zhì)的定性分析。當(dāng)激發(fā)光強(qiáng)度、波長、所用溶劑及溫度等條件固定時，物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)，其發(fā)射光強(qiáng)度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比關(guān)系，可以用作定量分析。熒光分析法的靈敏度一般較紫外分光光度法或比色法為高，濃度太大的溶液會有“自熄滅”作用，以及由于在液面附近溶液會吸收激發(fā)光，使發(fā)射光強(qiáng)度下降，導(dǎo)致發(fā)射光強(qiáng)度與濃度不成正比，故熒光分析法應(yīng)在低濃度溶液中進(jìn)行。
　　所用的儀器為熒光計(jì)或熒光分光光度計(jì)，按各藥品項(xiàng)下的規(guī)定，選定激發(fā)光波長和發(fā)射光波長，并配制對照品溶液和供試品溶液。
　　由于不易測定絕對熒光強(qiáng)度，故熒光分析法都是在一定條件下，用對照品溶液測得濃度的線性范圍后，再在每次測定前，用一定濃度的對照品溶液校定儀器的靈敏度；然后在相同的條件下，讀取對照品溶液及其試劑空白與供試品溶液及其試劑空白的讀數(shù)，用下式計(jì)算供試品濃度：
　　　　　　R<[i]>-R<[ib]>
　　C<[i]>＝──────×C<[r]>
　　　　　　R<[r]>－R<[rb]>
　　式中
　　C<[i]>為供試品溶液的濃度；
　　C<[r]>為對照品溶液的濃度；
　　R<[i]>為供試品溶液的讀數(shù)；
　　R<[ib]>為供試品溶液試劑空白的讀數(shù)；
　　R<[r]>為對照品溶液的讀數(shù)；
　　R<[rb]>為對照品溶液試劑空白的讀數(shù)。
　　因熒光分析法中的濃度與讀數(shù)的線性較窄，故(R<[i]>－R<[ib]>)/(R<[r]>－R<[rb]>)應(yīng)為0.50～2.0；如有超過，應(yīng)在調(diào)節(jié)溶液濃度后再測。醫(yī)學(xué)全.在線gydjdsj.org.cn
　　對易被光分解的品種 ,可選擇一種激發(fā)光和發(fā)射光波長與之近似而對光穩(wěn)定的物質(zhì)溶液，例如藍(lán)色熒光可用硫酸奎寧的稀硫酸溶液，黃綠色熒光可用熒光素鈉水溶液，紅色熒光可用羅丹明B水溶液等,先與對照品溶液比較測定其讀數(shù)關(guān)系，并在測定供試品溶液時用以代替對照品溶液，以校定儀器的靈敏度。
　　熒光分析法因靈敏度高，故干擾因素也多。溶劑不純會帶入較大誤差，應(yīng)先作空白檢查，必要時，應(yīng)用玻璃磨口蒸餾器蒸餾后再用。溶液中的懸浮物對光有散射作用，必要時，應(yīng)用垂熔玻璃濾器濾過或用離心法除去。所用的玻璃儀器與測定池等也必須保持高度潔凈。溫度對熒光強(qiáng)度有較大的影響，測定時應(yīng)控制溫度一致。溶液中的溶氧有降低熒光作用，必要時可在測定前通入惰性氣體除氧。

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文章錄入：凌云責(zé)任編輯：凌云

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