顯微鑒別系指用顯微鏡對藥材的切片、粉末、解離組織或表面制片及成方制劑中藥味的組織、細胞或內含物等特征進行鑒別的一種方法。 鑒別時選擇有代表性的樣品,根據各該藥材鑒別項的規(guī)定制片。成方制劑根據不同劑型適當處理后制片。 一、橫切片或縱切片:選取藥材適當部位,軟化后用徒手或滑走切片法,切成10~20μm的薄片,選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它試液處理后觀察。必要時可包埋后切片。 二、粉末制片:取粉末少量,置載玻片上,攤平,選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它適當試液處理后觀察。 三、表面制片:將樣品濕潤軟化后,切取一部分或撕取其表皮,加適宜的試液觀察。 四、解離組織片:如樣品中薄壁組織占大部分,木化組織少或分散存在,可用氫氧化鉀法;如果品堅硬,木化組織較多或集成較大群束,可用硝鉻酸法或氯酸鉀法。在解離前,應先將樣品切成寬或厚約2mm的小條或片。 1.氫氧化鉀法 置樣品于試管中,加5%氫氧化鉀溶液適量,加熱至用玻璃棒擠壓能離散為止,傾去堿液,加水洗滌后,取出少量置載玻片上,用解剖針撕開,以稀甘油裝置觀察。 2.硝鉻酸法 置樣品于試管中,加硝鉻酸試液適量,放置,至用玻璃棒擠壓能離散為止,傾去酸液,加水洗滌后,照1.法操作裝置。 3.氯酸鉀法 置樣品于試管中,加硝酸溶液(1→2)及氯酸鉀少量,緩緩加熱,待產生的氣泡漸少時,再及時加入氯酸鉀少量,以維持氣泡穩(wěn)定地發(fā)生,至用玻璃棒擠壓能離散為止,傾去酸液,加水洗滌后,照1.法操作裝置。 五、花粉粒與孢子制片:取花粉、花藥(或小的花朵)或孢子囊群(干燥樣品浸于冰醋酸中軟化),用玻璃棒搗碎,過濾于離心管中,離心,取沉淀加新鮮配制的醋酐與硫酸(9∶1)的混合液1~3ml,置水浴上加熱2~3分鐘,離心,取沉淀,用水洗滌2次,加50%甘油與1%苯酚3~4滴,用品紅甘油膠封藏觀察。也可用水合氯醛試液裝置觀察。 醫(yī)學全.在.線gydjdsj.org.cn 六、細胞及細胞內含物等的測量:在顯微鏡下測量細胞及細胞內含物等的大小,可用目鏡測微尺測量。先將目鏡測微尺裝入目鏡內,用鏡臺測微尺標化。標化時,轉動目鏡,移動鏡臺測微尺,使兩種量尺的刻度平行,左邊的“0” 刻度重合,再找第二條重合刻度。根據兩條重合刻度間兩種量尺的小格數,計算出目鏡測微尺每小格在該物鏡條件下所相當的大。é蘭)。測量時,以目鏡測微尺測量目的物的小格數,乘以每一小格的大小(μm)。通常是在高倍物鏡下進行,但欲測量較長的如纖維、非腺毛等的長度時,則以在低倍物鏡下測量較為方便。記錄最大值與最小值(μm),可允許有少量略高或略低于藥典規(guī)定的數值。 七、細胞壁性質的檢定: 1.木質化細胞壁 加間苯三酚試液1~2滴,稍放置,加鹽酸1滴,因木化程度不同,顯紅色或紫紅色。 2.木栓化或角質化細胞壁 加蘇丹Ⅲ試液,稍放置或微熱,顯橘紅色至紅色。 3.纖維素細胞壁 加氯化鋅碘試液;或先加碘試液濕潤后,稍放置,再加硫酸溶液(33→50);顯藍色或紫色。 4.硅質化細胞壁 加硫酸無變化。 八、細胞內含物性質的檢定: 1.淀粉粒 (1)加碘試液,顯藍色或紫色。 。2)用甘油醋酸試液裝置,置偏光顯微鏡下觀察,未糊化的淀粉粒顯偏光現象;已糊化的無偏光現象。 2.糊粉粒 。1)加碘試液,顯棕色或黃棕色。 。2)加硝酸汞試液,顯磚紅色。材料中如含有多量脂肪油,宜先用乙醚或石油醚脫脂后進行試驗。 3.脂肪油、揮發(fā)油或樹脂 (1)加蘇丹Ⅲ試液,顯橘紅色、紅色或紫紅色。(2)加90%乙醇,脂肪油不溶解(篦麻油及巴豆油例外),揮發(fā)油則溶解。
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