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直接進樣(direct injection)是近幾年發(fā)展起來的一種樣品不需要經(jīng)過預(yù)處理或只經(jīng)簡單的處理后直接注入色譜中進行分析.
在用HPLC進行體液中藥物分析或生物樣品分析時常需進行預(yù)處理,因為:1.為了使樣品的物理狀態(tài)適用于色譜柱.2.使帶測組分得到富集以達到儀器的靈敏度.
當(dāng)組分樣品同時含有大量蛋白質(zhì)或其他內(nèi)源性雜支時,預(yù)處理的方法比較復(fù)雜繁瑣.因此近年來在直接進樣方面有了很大的發(fā)展,目的就是為了解決這類問題.主要集中于直接進樣用固定相,柱切換技術(shù)及膠束色譜等方面.
下面簡單的介紹這三方面:
1. 直接進樣用固定相
直接進樣用固定相有如下特點.
(1)在一定條件下固定相對蛋白質(zhì)不保留或幾近不保留,而被測組分能夠被保留在柱上進行分離.
(2)當(dāng)被測組分的K落在合理的范圍內(nèi)時于固定相匹配的流動相中有機改性劑的溶度保持在低水平上,即固定相對被測組分的保留不能太強,避免由于流動相中有機改性劑的比例增加使蛋白質(zhì)沉積在柱上.固定相具有以上的特征主要是利用小孔徑硅膠對蛋白質(zhì)的排阻性質(zhì)和對硅膠基體表面進行適當(dāng)?shù)母男詠韺崿F(xiàn)的.例如當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的直徑大于硅膠孔徑時,蛋白質(zhì)分子就完全被排阻于填料孔徑之外.因此為了使蛋白質(zhì)不保留或幾近不保留需對硅膠進行改性. 醫(yī).學(xué).全.在.線www.med126.com
改性后的硅膠可以分為兩類(1)硅膠內(nèi)外具有不同的鍵合基團內(nèi)表面親水,不吸附蛋白質(zhì),內(nèi)表面疏水保留藥物.(2)硅膠的內(nèi)外表面具有相同的組成,都鍵合有親水疏水的基團,其作用是首先引入親水基團調(diào)節(jié)外表面的疏水性,使蛋白質(zhì)不沉積在外表面,但同時存在疏水基,外表面仍吸附部分蛋白質(zhì).但當(dāng)飽和時就不在吸附了,其次被測組分進入填料的空隙中,于混合基團的疏水基作用,保留在固定相中.
目前主要應(yīng)用的直接分析用固定相有以下幾種:
(a) 屏蔽疏水固定相（SHP）
SHP的硅膠上鍵合有親水性聚氧化乙烯的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有疏水性的苯基。小分子可以通過網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，大分子則被屏蔽在柱填料間隙處被洗脫。此固定相具有穩(wěn)定性好重現(xiàn)性好的特點，經(jīng)過1000次含有甲氧芐啶的血清直接進樣，色譜柱性能無較太大改變。
(b) 混合功能基固定相（MEP）
是指在多孔硅膠表面上同時鍵合有疏水和清水兩種基團的固定相。特點是對于親水性和疏水性的藥物均適用。可用于血清中極性較大的和非極性的藥物直接進樣分析，用這種固定相已成功的分析了血樣中的苯巴比妥、苯妥英、卡馬西平等抗癲癇藥的分析。
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