占體重約5%的無機鹽主要有Ca、Mg、K、Na、P和Cl,這六種無機元素約占體內(nèi)無機鹽總量的60%0-80%,主要存在于體液。
體內(nèi)所含元素約60種之多,作為定量檢測無機元素主要是Na、K、Cl、Mg、Ca、P、Cu、Zn和Fe等。測定這些元素一般以各種體液為標(biāo)本,主要是血清(漿)、尿、腦脊液和胸腹水。標(biāo)本應(yīng)注意及時處理及時檢測。在貯存過程中,Na會進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi),而K會從紅細(xì)胞進(jìn)入血漿。與此同時Ca也會移入細(xì)胞內(nèi),Cl會在Cl轉(zhuǎn)移過程中伴隨血清CO2量的變化而改變。作為上述元素的測定標(biāo)本要求采血后20min內(nèi)分離出血清,在室溫下可貯存數(shù)日,冰室內(nèi)貯存數(shù)周,低溫保存數(shù)月之久。
生理因素可影響其正常值的波動:如無機磷于餐后顯著升高;血清鐵早晨空腹呈高值,夜間呈低值,男性高于女性,不飽和鐵gydjdsj.org.cn/yaoshi/結(jié)合力恰是女性高于男性。
血清中所含色素對測定結(jié)果也有影響,一般高膽紅素、乳糜血及溶血等均影響測定結(jié)果,尤其是影響酶法測定值。
抗凝劑選擇很重要,一般不用抗凝劑,以血清進(jìn)行測定為宜。緊急情況下,應(yīng)采用肝素鋰抗凝。
(一)測定方法分類
體液或組織中無機鹽的測定一般可用以下幾類方法進(jìn)行。
⒈原子吸收分光亮度法 測定Ca、Fe、Cu、Zn、Mg、P、Pb、Cd、Hg、Al和As可采用原子分光亮度法。以組織塊為標(biāo)本的檢測更為適www.med126.com用。
⒉火焰亮度法 測定Na、K、Ca、Li、Cs和Zn可采用火焰亮度法。該方法屬于經(jīng)典的標(biāo)準(zhǔn)參考法,優(yōu)點是結(jié)果準(zhǔn)確可靠。國內(nèi)檢測Na、K的火焰亮度計種類較多。
⒊吸光亮度法 測定Ca、Fe、Cu、Mg、Zn和P可采用一般的比色分析法,此方法廣為臨床采用。
⒋螯合滴定法 測定Ca、Mg和Cl可采用特定的螯合劑滴定法進(jìn)行,滴定過程中易受多種因素影響,難以得到準(zhǔn)確的結(jié)果,屬于淘汰之列。
⒌離子選擇電極(iron selective electrode,ISE)法ISE法可用于Na、K、Cl、Ca、Li和H的測定,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,目前臨床多采用ISE法。
⒍離子色譜法 離子色譜法需特殊條件,可用于Na、K、Cl、Br和F的測定。臨床應(yīng)用很少。
⒎電量滴定法 Cl、Fe也可采用電量滴定法,非醫(yī)學(xué)方面應(yīng)用較多。
(二)無機元素在體內(nèi)存在形式
⒈Na、K和Cl 在體液及組織中,Na、K和Cl幾乎全以離子形式存在。
⒉Ca和Mg 在體液中Ca和Mg約有一半與蛋白質(zhì)結(jié)合,另一半以離子形式存在。
⒊Fe和Cu 體液中Fe與Cu幾乎全部與蛋白質(zhì)結(jié)合。
在體內(nèi)以離子形式存在的狀態(tài)下,可直接采用火焰光度法或離子選擇電極法。與蛋白質(zhì)結(jié)合狀態(tài)的無機元素,為了精確測定,尚需考慮除去蛋白質(zhì)再進(jìn)行定量。故Ca、Mg、Fe和Cu等金屬元素在嚴(yán)格控制蛋白質(zhì)干擾的條件下,才能用直接法進(jìn)行測定。
⒈火焰亮度法 1950年開始使用并一直沿用至今的火焰亮度法檢測血清、尿液、腦脊液及胸腹水的Na+和K+,是一種發(fā)射光譜分析法,準(zhǔn)確可靠的好方法,廣為臨床采用。
測定方法分為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)法和外標(biāo)準(zhǔn)法兩種。外標(biāo)準(zhǔn)法操作誤差較大,一般不采用,F(xiàn)在主要使用內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)法,即標(biāo)本及標(biāo)準(zhǔn)液采用加進(jìn)相同濃度的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)元素鋰或銫進(jìn)行測定。操作時,將含鋰的溶液作為稀釋液,同時測定K、Na和Li的濃度,以標(biāo)本與標(biāo)準(zhǔn)液的Na/Li與K/Li比值,計算Na、K濃度。由于血清稀釋倍數(shù)大,血清蛋白質(zhì)粘性的影響幾乎可忽略不計。國產(chǎn)的火焰光度計,廣為臨床使用。
⒉化學(xué)測定法 主要利用復(fù)環(huán)王冠化合物如穴冠醚或球冠醚,亦稱為冠醚,均為離子載體進(jìn)行測定,由于大環(huán)結(jié)構(gòu)內(nèi)有空穴,分子內(nèi)部氧原子有未共用電子對可與金屬離子結(jié)合,根據(jù)空穴大小,可選擇性結(jié)合不同直徑的金屬離子,從而可達(dá)到測出離子濃度的目的。測定血清K,一般采用普通冠醚陰離子染料進(jìn)行比色定量。
⒊離子選擇電極法 ISE法是采用靈敏的特定專用電極,在專用儀器上進(jìn)行血清和尿等體液的K+、Na+的測定,因標(biāo)本用量少,快速準(zhǔn)確,幾乎有取代其他方法的趨勢。其儀器測定原理是離子選擇電極與參比電極組合浸泡在待測標(biāo)本溶液中,進(jìn)行檢測。目前已有的電極種類為:①玻璃膜電極,感應(yīng)材料為玻璃薄膜的有pH電極、K+電極和Na+電極;②固相膜電極,由難溶性金屬物質(zhì)加壓成型,以固體膜或單日膜作為感應(yīng)膜的電極有Cl-電極和F-電極;③液態(tài)膜電極,將環(huán)氧樹脂或內(nèi)裝聚氯乙稀為感應(yīng)膜的Ca2+電極;④用纈氨霉素膜制成的K+電極。上述電極均有一定的壽命,因為電極使用一段時間就會自動老化,有效期長短不一。
目前有K、Na或K、Na、Cl或K、Na、Ca、Cl或K、Na、Cl、TCO2、pH組合的各種類型的電解質(zhì)分析儀。標(biāo)本用量少(100μl全血),1min出結(jié)果,快而準(zhǔn)確。國產(chǎn)的同類儀器價格較便宜,操作簡便。ISE法是目前所有方法中最為簡便準(zhǔn)確的方法。
⒋原子分光光度法 原子分光光度法可用于檢測血清K+、Na+,操作繁雜,誤差較大,不及火焰光度法簡便。
體液中Cl以離子形式存在,幾乎全與Na+平衡增減。測定Cl-的方法有多種。
⒈滴定法
⑴Molrr法:以K2CrO4為指示劑,用AgNO3滴定血清中Cl-,以過量的Ag+與CrO42-結(jié)合出現(xiàn)Ag2CrO4紅色沉淀為終點,根據(jù)AgNO3消耗量計算出標(biāo)本中Cl-的量。
⑵Sehales法:以二苯卡巴腙作指示劑,用Hg(NO3)2滴定血清中Cl-,以過量的Hg2+與二苯卡巴腙結(jié)合成不溶的紫藍(lán)色化合物為終點,根據(jù)Hg(NO3)2消耗量計算血清Cl-的量。
滴定法需要熟練的操作,終點要準(zhǔn)確,盡可能排除主觀因素的干擾,否則誤差很大。血清中過多的膽紅素.血脂及血紅蛋白(溶血)對結(jié)果干擾很大。滴定法有淘汰的趨勢。
⒉化學(xué)測定法:在Fe+存在下,采用Hg(SCN)2與Cl-反應(yīng)生成與Cl-等當(dāng)量的SCN3-,再與Fe3+結(jié)合成Fe(SCN)3的紅色化合物,進(jìn)行比色,定量標(biāo)本中Cl-的含量。
該法測定時,血清中其他因素如F.Br和I也可以起反應(yīng),其量少于1mmol/L,故可忽略不計。某些藥物及膽紅素均對其有影響。這種比色法消除主觀因素的影響,并可在自動生化分析儀進(jìn)行批量測定,屬臨床常用的一種方法。
⒊電量分析法:屬于物理學(xué)方法。在恒定的電流下,以銀電極置于標(biāo)本中,從電極釋放的Ag+與Cl-反應(yīng)開始生成不解離的AgCl沉淀開始計時,當(dāng)Cl-全部與Ag+作用完畢,游離的Ag+出現(xiàn),其溶液電導(dǎo)明顯增加,使儀器傳感器和計時器立即切斷電流并計算滴定所需的時間作為完成測定過程。氯的濃度用法拉第常數(shù)(9648庫侖/摩爾氯化物)運算,庫侖與滴定時間和電流的乘積成正比,以此計算出標(biāo)本中Cl-的含量。
標(biāo)本中Br-和I-對其有一定干擾,其量很少,可忽略不計。該法簡便,快速,在控制好電流條件下,是個較好的方法。
⒋離子選擇電極法 ISE法是目前測定Cl-的最好方法,因為測定Cl-的電極均與K+、Na+電極配套,僅需100μl全血即可測出標(biāo)本中K+、Na+和Cl-的含量而快速、準(zhǔn)確,操作簡便,是目前廣為臨床使用的方法。
ISE法需用Cl-電極,該電極由氯化銀.氯化鐵-硫化汞為膜性材料作成固體膜電極,與Na+.K+電極組裝于同一臺儀器上,使用簡便。標(biāo)本中Br-和I-,雖有干擾,其量甚微,可忽略不計。該電極壽命較短,一般有效期僅4-6個月。Na+電極有效期8-10個月,K+電極6-8個月。近幾年已出現(xiàn)長有效期(2年)的K+、Na+、Cl-電極,為臨床的使用提供了方便。