WetterauJ.R等于1984年發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞微粒體的離子強(qiáng)度緩沖液里有加速甘油三酯和膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)作用，用Bio-Gel A-5m和Hydroxylapatite純化，并監(jiān)測(cè)其活性，發(fā)現(xiàn)該蛋白的激活作用促進(jìn)甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)的活力大。經(jīng)凝膠過(guò)濾測(cè)得分子量約為150kD，部分純化產(chǎn)品等電點(diǎn)為pH5.2～5.6，該蛋白即為微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白（microsmal triglyceridetransfer protein, MTTP)。
1991年，Wetteran J R等發(fā)現(xiàn)MTR由58kD和88kD的兩種亞基組成的異二聚體復(fù)合物。這一特點(diǎn)使之與以前報(bào)道的脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白加以區(qū)別，以前報(bào)道的脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是單一多肽，分子量從8kD到53kD不等，發(fā)現(xiàn)幾種哺乳動(dòng)物包括人的血漿中的膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（CETP)，均屬于糖蛋白，分子量為74kD，含一個(gè)53kD的多肽骨架。
MTP的58kD的小亞基通過(guò)氨基酸分析和免疫化學(xué)分析表明他是蛋白二硫鍵異構(gòu)酶（protein disulfide isomerase,PDI；EC5.3.4.1)早在1963年就在肝和胰腺組織中發(fā)現(xiàn)此酶，其功能之一是催化蛋白質(zhì)生物合成中的二硫鍵形成，具有較寬的底物特異性。PDI在新鮮制備的鼠肝微粒體中未能檢測(cè)其活性，但破膜后，可檢測(cè)到二硫鍵異構(gòu)酶活性。PDI是一種多功能蛋白，據(jù)報(bào)道他又是脯氨酰-4-羥化酶（prolyl 4-hydroxylase)的β亞單位；還與寡糖基轉(zhuǎn)移酶的糖化位點(diǎn)結(jié)合蛋白亞組分高度相似。PDI羧基端序列Lys-Asp-Glu-Leu與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上相應(yīng)受體結(jié)合，使之與88kD組分一起保留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)，PDI基因定位在17號(hào)染色體。據(jù)估計(jì)，牛肝內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中游離PDI濃度超過(guò)MTP中PDI濃度的五倍。此，PDI自我組裝成二聚體和四聚體。MTP中PDI的二硫鍵異構(gòu)酶活性?xún)H是自由PDI的十分之一。
用沉降平衡實(shí)驗(yàn)表明，這種150kD的MTP有三種不同的沉降速率。他們分別是MTP、PDI和一個(gè)88kD的亞基。進(jìn)一步用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，考馬斯亮藍(lán)染色測(cè)定一定量MTP中PDI含量，與標(biāo)準(zhǔn)PDI比較，表明PDI：88kD亞基之比為1：0.98～1.30，證明MTP中58kD的PDI和88kD亞基化學(xué)計(jì)量為1：1。通過(guò)超速離心發(fā)現(xiàn)沉降系數(shù)為5.85,Stoke半徑為4.7μm。用鹽酸胍變性實(shí)驗(yàn)表明，MTP可抵抗0.8M鹽酸胍的變性作用，PDI與88kD亞基結(jié)合穩(wěn)定。PDI與MTP大亞基作用不可逆，到目前為止，試圖用其組分或外源PDI重建MTP復(fù)合體還未功能。通過(guò)遠(yuǎn)紫外圓二色光譜分析表明，MTP約有28%α螺旋和隨機(jī)結(jié)構(gòu)（分別為31%和34%)，而88kD亞基的β折疊占35%。
MTP的大亞基與已發(fā)現(xiàn)的蛋白相比未發(fā)現(xiàn)高度同源性。Shoulders等從MTP辨認(rèn)出幾個(gè)區(qū)域與卵黃磷脂蛋白的序列有低水平同源性。卵黃磷脂蛋白是產(chǎn)卵動(dòng)物中脂蛋白復(fù)合體的蛋白質(zhì)組分，由卵黃生成素裂解而成�；诎被嵝蛄小⒎肿幽Ｐ秃突蚪Y(jié)構(gòu)的比較，認(rèn)為MTP大亞單位是卵黃生成素基因家族成員之一。
1993年Sharp D.等克隆MTP 88kD大亞基的cDNA并進(jìn)行序列分析，比較人和牛的cDNA表明有88%核苷酸序列相同，在人MTP大亞基的3"末端有基因組DNA編碼的18個(gè)腺苷酸殘基，預(yù)測(cè)的分子量97kDa，人和牛MTP大亞基單位氨基酸有86%同源性，加上保守性氨基酸替換，人與牛MTP大亞基單位有94%同源性。在核苷酸和蛋白序列數(shù)據(jù)庫(kù)中未發(fā)現(xiàn)其他蛋白與之同源。
SharpD.等MTP88kD大亞基基因結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析（圖7-7)。其基因跨越55～60Kb，由18個(gè)外顯子組成，外顯子1和18也分別包括5"和3"的非編碼序列。除掉含非編碼序列的外顯子1和18，平均每個(gè)編碼外顯子的長(zhǎng)度是153bp。
.jpg)
圖7-7 人MTP大亞基的基因結(jié)構(gòu)
上線(xiàn)表明基因跨度；第二線(xiàn)為MTP大亞基的18個(gè)外顯子
示意圖；第三四線(xiàn)分別是EcoRI（R)和Hind（H)的酶切位點(diǎn)。
SharpD等早期報(bào)道，人MTp cDNA 5"端非編碼區(qū)有64個(gè)核苷酸。用錨定PCR檢測(cè)MTpcDNA的5"末端，從兩個(gè)獨(dú)立PCR產(chǎn)物的直接序列分析揭示，從翻譯起始的上游有86bp的非編碼序列（見(jiàn)圖7-8)。所有86bp5"端非翻譯區(qū)均編碼外顯子1，外顯子1還有61bp編碼信號(hào)肽及成熟蛋白2個(gè)氨基酸。在翻譯起始框外上游25bp有一個(gè)ATG，但該處沒(méi)有適合的起始環(huán)境，第二個(gè)ATG是真正的翻譯起始點(diǎn)。
.jpg)
圖7-8 MTP大亞基的5"側(cè)翼序列
轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)5"側(cè)翼序列不含TATA盒，但富含AT序列，在轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游約30bp的AAAGATAAA可能被TATA結(jié)合蛋白（TFⅡD)識(shí)別。用Nothern blot雜交及分析MTP活性表明MTP在肝和腸表達(dá)，在卵巢、睪丸和腎也發(fā)現(xiàn)有低水平MTp mRNA表達(dá)。計(jì)算機(jī)輔助分析轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游743bp序列表明，他與幾種已知順式作用元件同源，可調(diào)節(jié)MTP組織特性性表達(dá)。在轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)第一個(gè)200bp序列含肝特異C/EBP、HNF-1和HNF-5轉(zhuǎn)錄因子識(shí)別的上游啟動(dòng)子元件，該區(qū)還含有通用轉(zhuǎn)錄因子Sp-1和Ap-1識(shí)別序列。Sp-1，C/EBP、HNF-1和HNF-5在該區(qū)的位點(diǎn)有單個(gè)堿基錯(cuò)配。其他比第一個(gè)200bp更上游的順式元件可被HNF-5，C/EBP和CTF/NF-1識(shí)別。
MTP大亞基限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析或簡(jiǎn)單序列的串聯(lián)重復(fù)多態(tài)性分析，均可用于調(diào)查MTP基因與異常血漿脂類(lèi)或脂蛋白代謝的聯(lián)系。CA雙核苷酸重復(fù)多態(tài)性在人基因組隨處可見(jiàn)，這種重復(fù)可用PCR分析，因而是一種理想的基因標(biāo)記。為了識(shí)別CA雙核苷酸重復(fù)序列，用一個(gè)CA重復(fù)的探針來(lái)與MTP大亞基因進(jìn)行雜交，在內(nèi)含子10發(fā)現(xiàn)非完整CA重復(fù)結(jié)構(gòu)(CA)4AA(CA)3GA(CA)4TA(CA)nTACA,分析18個(gè)不相關(guān)個(gè)體的36個(gè)等位基因表明有8種變異，n從8到17。熒光原位雜交表明MTP大亞基基因位于4號(hào)染色體，即4q28-q31。
脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白促進(jìn)膜間不溶性脂類(lèi)分子轉(zhuǎn)運(yùn)，MTP的特性在于他剌激膜間中性脂類(lèi)（甘油三酯、膽固醇酯、磷脂酰膽堿)轉(zhuǎn)運(yùn)。脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白也能促進(jìn)膜間脂質(zhì)分子交換或促進(jìn)從一種膜向另一種膜凈轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì)分子，雖然有例外，但在體外分析表明脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白一般是促進(jìn)膜間脂質(zhì)分子交換。當(dāng)供體和受體膜間TG濃度相等時(shí)，MTP能促進(jìn)膜間交換TG，而且當(dāng)供體和受體膜間中性脂類(lèi)濃度不平衡，中性脂類(lèi)仍可轉(zhuǎn)移到受體顆粒，表明MTP能凈gydjdsj.org.cn/pharm/轉(zhuǎn)運(yùn)TG和CE。MTP存在于肝細(xì)胞和小腸細(xì)胞微粒體腔內(nèi)，在富含甘油三酯的脂蛋白的正常組裝、分泌中起有重要作用。用MTP抑制劑研究表明，MTP在含ApoB48脂蛋白組裝的早期而不是晚期起作用，光親和MTP抑制劑能阻斷McArdle RH-7777細(xì)胞分泌含ApoB的脂蛋白，當(dāng)gydjdsj.org.cn/kuaiji/這種細(xì)胞在缺乏MTP抑制劑和油酸時(shí)，貧脂質(zhì)（HDL)的ApoB48顆�？梢孕纬�，但不能分泌。油酸加入這種培養(yǎng)細(xì)胞后可轉(zhuǎn)化成能分泌的富脂質(zhì)的顆粒。然而，如果在貧脂復(fù)合體形成之后加入MTP光親和抑制劑，則對(duì)這種轉(zhuǎn)化或分泌過(guò)程沒(méi)有作用。
1992年Wetterau J.R等報(bào)道無(wú)β脂蛋白血癥患者M(jìn)TP活性和MTP蛋白缺陷。SharpD.等1993年從一個(gè)無(wú)β脂蛋白血癥患者取小腸活檢，該患者是近親婚配的女性后代，39歲，用RT-PCR結(jié)合序列分析表明215位胞嘧啶缺失，導(dǎo)致發(fā)生移碼突變，移碼突變導(dǎo)致在下游21個(gè)堿基處過(guò)早形成一個(gè)終止密碼，并預(yù)測(cè)翻譯產(chǎn)物為78個(gè)氨基酸。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)該患者是移碼突變的純合子。從一個(gè)14歲女性無(wú)β脂蛋白血癥患者發(fā)現(xiàn)1783位C→T轉(zhuǎn)換，這個(gè)突變使Arg密碼變成終止密碼，產(chǎn)生594個(gè)氨基酸的截短產(chǎn)物。這個(gè)無(wú)義突變消除了一個(gè)TaqⅠ限制性?xún)?nèi)切酶位點(diǎn)。Southern雜交分析表明該患者為純合子，而其父母都是含正常和突變的雜合子。為檢測(cè)這些突變對(duì)MTP的影響，將PDI和野生或突變MTP大亞基用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在sfq昆蟲(chóng)細(xì)胞共同表達(dá)。用表達(dá)PDI和野生MTP大亞基病毒共傳染sfp細(xì)胞，可產(chǎn)生有活性的MTP。相反，用表達(dá)PDI和突變MTP大亞基病毒共傳染sfq細(xì)胞，則不能產(chǎn)生有活性蛋白，突變蛋白也形成不容性凝聚體，不能與PDI結(jié)合。該結(jié)論可用解釋無(wú)β脂蛋白血癥患者的突變后MTP活性和MTP蛋白的缺陷。到目前為止，MTP大亞基的突變有碼突變、無(wú)義突變及點(diǎn)突變改變了MTP的正常剪接。
