一、血管內(nèi)皮細(xì)胞鑒定
在操作過程中，可能混入成纖維細(xì)胞平滑肌細(xì)胞。鑒定血管內(nèi)皮細(xì)胞基礎(chǔ)gydjdsj.org.cn/jianyan/是根據(jù)他自身的形態(tài)、性質(zhì)。內(nèi)皮細(xì)胞有三個(gè)顯著特點(diǎn)：①形態(tài)學(xué)呈單層鋪路石樣排列，如前所述；②電子顯微鏡下可發(fā)現(xiàn)Weibel-Palade小體；③存在第Ⅷ因子關(guān)連抗原（VWF)，用免疫法測(cè)定為陽性反應(yīng)。此外，在硬化血管取材時(shí)，巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化的泡沫細(xì)胞可能混入，除形態(tài)學(xué)的差異外，泡沫細(xì)胞含有豐富的氧化修飾的LDL，氧化LDL與相應(yīng)抗體反應(yīng)后在熒光顯微鏡下極易區(qū)別。
二、平滑肌細(xì)胞的鑒定
如前所述，平滑肌細(xì)胞除形態(tài)、排列有其自身特點(diǎn)外，重要一點(diǎn)是胞漿內(nèi)有很多與細(xì)胞縱軸平行的肌絲及與其相連的致密體。在培養(yǎng)時(shí)，對(duì)正常組織而言，主要混有成纖維細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞。能夠準(zhǔn)確識(shí)別其中一、二類細(xì)胞，其他細(xì)胞也就不難鑒別了。
三、常用的鑒定方法和條件
細(xì)胞鑒定法一般有細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察法、免疫化學(xué)技術(shù)觀察法、活細(xì)胞直接觀察法和培養(yǎng)細(xì)胞生物化學(xué)性狀檢測(cè)。
1．細(xì)胞一般形態(tài)學(xué)觀察法
常用方法有兩種，一是用普通顯微鏡，將細(xì)胞固定，染色后觀察；二是用電子顯微鏡將組織細(xì)胞切片、固定、包埋后觀察。
2．免疫化學(xué)技術(shù)觀察法
免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)是用熒光素或酶等標(biāo)記物或顯示物標(biāo)記特異性抗體，通過免疫學(xué)中的抗原抗體反應(yīng)與細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)抗原結(jié)合www.med126.com，形成帶有熒光素或顯色物的抗原抗體復(fù)合物，用熒光顯微鏡或普通顯微鏡觀察復(fù)合物存在與否，達(dá)到鑒別細(xì)胞的目的。這一技術(shù)包括標(biāo)本處理（制備、保存、固定等)，染色和結(jié)果判斷。
3．活細(xì)胞直接觀察法
細(xì)胞培養(yǎng)法可直接觀察活細(xì)胞，是組織培養(yǎng)技術(shù)的一個(gè)突出優(yōu)點(diǎn)。培養(yǎng)的活細(xì)胞在一般顯微鏡下，由于細(xì)胞透明，反差很少，不易看清細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)，因此這一技術(shù)需要采用相差顯微鏡。較新的顯微攝影術(shù)（time-lapse cinemicrophotagraphy,TLCM)是直接記錄活細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化最為理想的方法，能記錄細(xì)胞連續(xù)動(dòng)態(tài)變化過程，具有客觀性和示教性。
4．培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)性狀檢測(cè)
觀察細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中，從初代培養(yǎng)開始，到繼續(xù)培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)必須每天進(jìn)行常規(guī)觀察細(xì)胞是否有污染，生長狀況，培養(yǎng)液是否需要更換，這是保證實(shí)驗(yàn)成功的基礎(chǔ)。所謂生物性狀檢測(cè)包括上述三種方法的運(yùn)用，這里主要談以下幾個(gè)方面：①形態(tài)學(xué)觀察，培養(yǎng)的細(xì)胞可能每日每時(shí)都會(huì)發(fā)生形態(tài)改變，形態(tài)觀察又包括一般形態(tài)學(xué)觀察，超微結(jié)構(gòu)觀察如亞細(xì)胞器微絨毛的形態(tài)，微絲微管，核仁的形態(tài)和數(shù)量排列分布狀況等；②細(xì)胞增殖生長觀察，包括細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)細(xì)胞是測(cè)定細(xì)胞絕對(duì)增長數(shù)量常用最簡便的方法；細(xì)胞分裂指數(shù)（mitotic index,MD)即細(xì)胞分裂指數(shù)=細(xì)胞分?jǐn)?shù)相數(shù)/1000細(xì)胞×100。計(jì)算分裂相時(shí)要注意掌握確定分裂相標(biāo)準(zhǔn)，其中主要是確定好劃分間期和前期、末期和間期等的界限。另外，還有兩個(gè)指標(biāo)即接種存活率和克隆形成率，細(xì)胞接種存活率=形成克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)×100，細(xì)胞數(shù)接種率=貼壁存活細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)×100；③其他觀察，如癌細(xì)胞具有浸潤性生長能力，這一能力是檢測(cè)癌細(xì)胞的指標(biāo)。
總之，動(dòng)脈粥樣硬化是多因素、多細(xì)胞相互作用的結(jié)果，細(xì)胞培養(yǎng)是研究這一疾病最有效方法之一。不同的動(dòng)物血管組成、性質(zhì)不同；不同研究者有不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康�，所采用的方法也不盡相同。這里只是將血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管中膜平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定作一扼要敘述，隨著研究的深入，方法和手段也會(huì)不斷改進(jìn)和發(fā)展。
（黃俊軍 周新)
