近20年來分子克隆技術的發(fā)展突飛猛進,重組DNA操作技術包括的范圍不斷擴大,DNA克隆的方法亦多種多樣,特別是PCR技術的應用,以及RFLP、SSCP等技術的開展,使得DNA克隆技術的應用日益廣泛。
DNA克隆技術在動脈粥樣硬化等疾病的病因及診療研究中也有重要的作用。例如在研究脂蛋白酯酶基因發(fā)生的特異突變時,可以設計合成擴增引物,進行模板DNA的PCR擴增,所得的PCR產(chǎn)物較小,僅有300多bp,且純度不足以進測序。為了對此突變序列進行測序分析,就可以采用DNA克隆的方法,將此PCR產(chǎn)物連接到www.med126.com細菌質(zhì)粒上,再進一步純化后測序,以便鑒定脂蛋白酯酶的突變序列。
下面簡要介紹DNA克隆和測序的常用方法。