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1、胚胎的采集與洗滌利用雙通式或三通式導管沖卵器多次向子宮角注入沖卵液，反復沖洗回收
桑椹至胚期胚胎。2、加入冷凍液室溫條件下，在加入1.4M/L
甘油的冷凍液中
脫水平衡20min。3、裝管和標記將胚胎與冷凍液按前述方法裝入0.25ml細管中，并在細管外標記供體牛號、胚胎數(shù)量、等級、冷凍日期等。4、冷凍和誘發(fā)結晶（植冰)將裝入細管的胚胎放入冷凍儀中，在0℃平衡10min，以l℃/min的速度降至-6～-7℃，在此溫度下誘發(fā)結晶，并平衡10min，然后以O.3℃/min的速度降溫至-35～-38℃，投入液氮保存。5、解凍和脫除保護劑從液氮中取出裝胚胎的細管，立即投入37℃水浴中，并輕輕擺動，1min后取出即完成解凍過程。然后用O.2～O.5M蔗糖
酪酸鹽緩沖液（PBS)分兩步或一步法脫除冷凍保護劑使胚胎復蘇，最后移人PBS培養(yǎng)液中準備移植。
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