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二 醋酸纖維薄膜電泳
醋酸纖維薄膜（CAM)是一種由醋酸纖維加工制成的一種細(xì)密且薄的微孔膜。根據(jù)其乙酰化程度、厚度、孔徑和網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)等方面不同而具有不同類型�，F(xiàn)已廣泛應(yīng)用于各種生物分子的分離分析中，如血清蛋白、血紅蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋白、類固醇及同工酶等。它具有簡單快速等優(yōu)點(diǎn)：①電泳區(qū)帶界限清晰；②通電時(shí)間較短（20min至1h)；③對(duì)各種蛋白質(zhì)基本無吸附，因此無拖尾現(xiàn)象；④不吸附染料，因此薄膜上未與蛋白質(zhì)結(jié)合的染料可完全洗掉，顯示電泳區(qū)帶背景干凈。電泳須在密閉容器中使用較低電流進(jìn)行，因薄膜吸水量較低，可避免過分蒸發(fā)。其電滲作用雖高但很均一，不影響樣品分離效果。不足之處是分辨率比聚丙烯酰胺凝膠電泳低，由于薄膜厚度小（約10～100μｍ)，樣品用量很少，不適于制備。
影響電泳的因素：①膜的性質(zhì)；②緩沖溶液的組成，pH值和濃度；③電流和有效電壓；④電泳時(shí)間和溫度；⑤電泳槽的密封性能。
操作步驟：點(diǎn)樣→電泳→染色→漂洗→透明→測(cè)定吸光度。
選用一定長度和寬度的薄膜條，在其一端處點(diǎn)上樣品，在一定電壓、電泳條件下，進(jìn)行電泳。染色可根據(jù)不同物質(zhì)使用不同的顯色方法，如核苷酸等物質(zhì)可在紫外分析燈下觀察定位。染色漂洗后，可將電泳區(qū)帶剪下，溶于一定溶液中進(jìn)行吸光度測(cè)定，也可浸于折射率為1.474的油中或其他透明液中使之透明，然后直接用吸光度計(jì)測(cè)定。
?電泳結(jié)果不滿意或失敗的可能原因有：①醋酸纖維素薄膜過分干燥出現(xiàn)白斑、膜彎曲、表面緩沖液過多；②緩沖溶液濃度過高或使用次數(shù)太多，時(shí)間過長而改變濃度；③樣品量太多、加樣不整齊、起始位置錯(cuò)誤；④電泳時(shí)間過長或過短、電泳槽密閉性不好、電流太大、溫度過高；⑤染色液連續(xù)使用次數(shù)過多，pH值改變。
三 瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖是從瓊脂中提取出來的，是由D-半乳糖和3、6-脫水-Ｌ-半乳糖結(jié)合的鏈狀多糖，含硫酸根比瓊脂少，因而分離效果明顯提高。
瓊脂糖電泳具有以下優(yōu)點(diǎn)：①瓊脂糖含液體量大，可達(dá)98%～99%，近似自由電泳，但樣品的擴(kuò)散度比自由電泳小，對(duì)蛋白質(zhì)的吸附極微；②瓊脂糖作為支持體有均勻、區(qū)帶整齊、分辨率高重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)；③電泳速度快；④透明而不吸收紫外線，可以直接用紫外檢測(cè)儀作定量測(cè)定；⑤區(qū)帶可染色，樣品易回收，有利于制備。缺點(diǎn)是瓊脂糖中有較多硫酸根，電滲作用大。
緩沖液的選用：瓊脂糖電泳常用緩沖液的pH在6～9之間，離子強(qiáng)度為0.02～0.05。離子強(qiáng)度過高時(shí)，會(huì)有大量電流通過凝膠而產(chǎn)生熱量，使凝膠水分蒸發(fā)，析出鹽結(jié)晶。嚴(yán)重可使凝膠斷裂，電流中斷。常用緩沖液有硼酸鹽緩沖液與巴比妥緩沖液。為防止電泳時(shí)兩極緩沖液槽內(nèi)pH和離子強(qiáng)度改變，可在每次電泳后合并兩極槽內(nèi)的緩沖液混勻后再使用。
瓊脂糖電泳常用于抗原抗體反應(yīng)的分析，抗體的分離。其種類較多，如高壓瓊脂糖免疫電泳，定量免疫電泳（火箭免疫電泳，雙向免疫電泳)等。
四 聚丙烯酰胺凝膠電泳
聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠作為載體的一種區(qū)帶電泳，這種凝膠由丙烯酰胺，簡稱Acr和交聯(lián)劑Ｎ，Ｎ′－甲叉基（亞甲基)雙丙烯酰胺，簡稱Bis聚合而成。
聚丙烯酰胺凝膠具有機(jī)械強(qiáng)度好，彈性大，透明，化學(xué)穩(wěn)定性高，無電滲作用，設(shè)備簡單，用樣量少（1-100μｇ)和分辨率高等優(yōu)點(diǎn)。并可通過控制單體濃度或單體與交聯(lián)劑的比例聚合成孔徑大小不同的凝膠，可用于蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)的分離、定性和定量分析。
還可結(jié)合去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS)，以測(cè)定蛋白質(zhì)亞基分子量。
根據(jù)凝膠形狀可分為盤狀電泳和板狀電泳。盤狀電泳是在直立的玻璃管內(nèi)，利用不連續(xù)的緩沖液的pH值進(jìn)行電泳，同時(shí)，由于樣品混合物被分開后形成的區(qū)帶非常窄，呈圓盤狀，故而得名。板狀電泳（垂直或水平)是將丙烯酰胺聚合成方形或長方形平板狀，平板大小和厚度視實(shí)驗(yàn)需要而定。垂直平板電泳有如下優(yōu)點(diǎn)：①表面積大，易于冷卻，便于控制溫度；②能在同一凝膠板上，相同操作條件下，同時(shí)點(diǎn)加多個(gè)樣品，便于相互比較；③一個(gè)樣品在第一次電泳后，可將平板轉(zhuǎn)90度進(jìn)行第二次電泳即雙向電泳；④便于用各種方法鑒定（如放射自顯影等)。其缺點(diǎn)是制備凝膠時(shí)操作較復(fù)雜，電壓較高，電泳時(shí)間較長。
