| 公開(公告)號 | CN1121411C |
| 公開(公告)日 | 2003.09.17 |
| 申請(專利)號 | CN99120613.4 |
| 申請日期 | 1999.12.13 |
| 專利名稱 | 多肽藥物的高效基因工程生產(chǎn)方法 |
| 主分類號 | C07K14/00 |
| 分類號 | C07K14/00;C12N15/11;C12N15/08;C12N15/74;C12N15/79;C12P21/00 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 1999.11.24 CN 99114570.4 |
| 申請(專利權(quán))人 | 劉建寧 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 孫自勇;劉建寧 |
| 地址 | 215008江蘇省蘇州市談家巷新村1幢203室 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 南京蘇科專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 夏平 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項 | 一種多肽的基因工程制備方法，其特征在于在DNA水平上將目標(biāo)肽段DNA序列串聯(lián)為多聚體，其中目標(biāo)肽段的長度為5-44個氨基酸，串聯(lián)單體的數(shù)量為2-32，在表達目標(biāo)肽的核酸的5’端及3’端分別加上一段間隔序列，再分別加上同尾酶的識別序列，通過用同尾酶水解、連接反應(yīng)步驟的重復(fù)，構(gòu)建目標(biāo)肽段基因的串聯(lián)重復(fù)多聚體，并用原核細胞表達目標(biāo)肽段的串聯(lián)重復(fù)多聚體，利用所述間隔序列所編碼的氨基酸序列作為目標(biāo)肽段多聚體的斷裂、切割加工位點，用化學(xué)或者酶學(xué)方法將表達的目標(biāo)肽段多聚體斷裂，切割加工為目標(biāo)肽段單體分子，其中所述的間隔核苷酸序列的選擇應(yīng)滿足下述條件，即其編碼的氨基酸序列經(jīng)斷裂、切割加工后使所得的目標(biāo)肽單體的序列與原有序列相比沒有變化。 |
| 摘要 | 本發(fā)明用真核或原核細胞表達低分子量多肽活性物質(zhì)。在核酸水平上，利用DNA限制性內(nèi)切酶中的同尾酶具有識別水解不同DNA序列，但產(chǎn)生相同的粘性末端，且當(dāng)二者的粘性末端連接后，該位點不再能被同尾酶識別的特性，將編碼目標(biāo)肽段的DNA分子串聯(lián)重復(fù)，構(gòu)成多聚體，并根據(jù)目標(biāo)肽段的氨基酸組成及序列特點，在各DNA單體分子間插入適當(dāng)?shù)暮塑账嵝蛄�，這些特定的核苷酸序列在翻譯為氨基酸后，成為使串聯(lián)重復(fù)目標(biāo)肽段的多聚體斷裂為單體的加工位點。 |
| 國際公布 |
