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含游離半胱氨酸殘基的蛋白重折疊的方法

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1443194A  
公開(kāi)(公告)日 2003.09.17  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN01812855.6  
申請(qǐng)日期 2001.05.16  
專利名稱 含游離半胱酸殘基的蛋白重折疊的方法  
主分類(lèi)號(hào) C07K1/113  
分類(lèi)號(hào) C07K1/113;C07K14/535;C07K14/505;C07K14/515;C07K14/56;C07K14/61;C07K14/78  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán) 2000.5.16 US 60/204,617  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 博爾德生物技術(shù)公司  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 瑪麗·S·羅森達(dá)爾;喬治·N·考克斯  
地址 美國(guó)科羅拉多州  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng) PCT/US01/16088 2001.5.16  
進(jìn)入國(guó)家日期 2003.01.15  
專利代理機(jī)構(gòu) 北京市柳沈律師事務(wù)所  
代理人 巫肖南;封新琴  
國(guó)省代碼 美國(guó);US  
主權(quán)項(xiàng) 制備重折疊可溶形式的不溶或聚集蛋白的方法,其中所述蛋白是生長(zhǎng)激素超基因家族成員且含一個(gè)或多個(gè)游離半胱氨酸殘基,所述方法包括步驟:a.使宿主細(xì)胞表達(dá)蛋白,所述蛋白是不溶或聚集形式的生長(zhǎng)激素超基因家族成員;b.用化學(xué)方法、酶學(xué)或物理方法裂解細(xì)胞;c.使不溶或聚集的蛋白接觸變性試劑、還原劑和半胱氨酸阻斷劑而溶解不溶或聚集的蛋白;和d.通過(guò)使變性試劑和還原劑的濃度降低到足以允許蛋白復(fù)性為可溶的生物活性形式的水平而重折疊蛋白。  
摘要 本發(fā)明涉及制備具有游離半胱氨酸的重折疊不溶或聚集蛋白的新方法,其中宿主細(xì)胞表達(dá)的蛋白接觸半胱氨酸阻斷劑。然后,可修飾該新方法制備的可溶重折疊蛋白以增加它們的效力。這種修飾包括連接PEG部分以形成PEG化蛋白。  
國(guó)際公布 WO01/87925 英 2001.11.22  
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