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用于檢測磷酸基-N-乙酰胞壁酰五肽移位酶活性的測定方法方法

公開(公告)號 CN1157484C  
公開(公告)日 2004.07.14  
申請(專利)號 CN00806590.X  
申請日期 2000.04.19  
專利名稱 用于檢測磷酸基-N-乙酰胞壁酰五肽移位酶活性的測定方法  
主分類號 C12Q1/48  
分類號 C12Q1/48  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán) 1999.4.22 WO PCT/IN99/00013  
申請(專利權(quán))人 阿斯特拉曾尼卡有限公司  
發(fā)明(設(shè)計)人 K·達(dá)斯;J·拉馬查德蘭  
地址 瑞典南泰利耶  
頒證日 2004.07.14  
國際申請 PCT/SE2000/000772 2000.4.19  
進(jìn)入國家日期 2001.10.22  
專利代理機(jī)構(gòu) 中國專利代理(香港)有限公司  
代理人 羅宏;建成  
國省代碼 瑞典;SE  
主權(quán)項 一種檢測磷酸基-N-乙酰胞壁酰五肽移位酶的酶活性的測定方法,其包含下列步驟:(1)在適于酶活性發(fā)生的條件下培養(yǎng)反應(yīng)混合物,其包含,在含水介質(zhì)中,N-琥珀酰亞胺基[2,3-3H]丙酸酯取代的UDP-MurNAc-五肽,N-琥珀酰亞胺基丙酸酯取代的UDP-MurNAc-五肽(非-放射性的),二價金屬離子源,十一異戊二烯基磷酸酯源,去污劑和移位酶源;(2)在PH~4.2,用含季銨鹽的適當(dāng)緩沖液酸化反應(yīng)混合物,以終止步驟(1)的酶反應(yīng);和(3)提取所形成的任一十一異戊烯醇-焦磷酸酯-[2,3-3H]丙酸酯-N-乙酰胞壁酰五肽產(chǎn)物,并使用閃爍計數(shù)器測量放射性。  
摘要 本發(fā)明提供一種檢測磷酸基-N-乙酰胞壁酰五肽移位酶的酶活性的測定方法,其包含下列步驟:(1)培養(yǎng)反應(yīng)混合物,其包含,在含水介質(zhì)中,N-琥珀酰亞胺基[2,3-3H]丙酸酯取代的UDP-MurNAc-五肽,N-琥珀酰亞胺基丙酸酯取代的UDP-MurNAc-五肽(非-放射性的),二價金屬離子源,十一異戊二烯基磷酸酯源,去污劑和移位酶源,在適于酶活性發(fā)生的條件下;(2)在pH~42,用含季銨鹽的適當(dāng)緩沖液酸化反應(yīng)混合物,以終止步驟(1)的酶反應(yīng);(3)提取所形成的任一十一異戊烯醇-焦磷酸酯-[2,3-3H]丙酸酯-N-乙酰胞壁酰五肽產(chǎn)物,并使用閃爍計數(shù)器測量放射性,且提供在其中使用的試劑盒。  
國際公布 WO2000/065087 英 2000.11.2  
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