公開(公告)號
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CN1157484C
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公開(公告)日
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2004.07.14
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申請(專利)號
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CN00806590.X
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申請日期
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2000.04.19
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專利名稱
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用于檢測磷酸基-N-乙酰胞壁酰五肽移位酶活性的測定方法
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主分類號
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C12Q1/48
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分類號
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C12Q1/48
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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1999.4.22 WO PCT/IN99/00013
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申請(專利權(quán))人
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阿斯特拉曾尼卡有限公司
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發(fā)明(設(shè)計)人
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K·達(dá)斯;J·拉馬查德蘭
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地址
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瑞典南泰利耶
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頒證日
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2004.07.14
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國際申請
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PCT/SE2000/000772 2000.4.19
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進(jìn)入國家日期
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2001.10.22
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專利代理機(jī)構(gòu)
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中國專利代理(香港)有限公司
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代理人
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羅宏;姜建成
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國省代碼
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瑞典;SE
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主權(quán)項
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一種檢測磷酸基-N-乙酰胞壁酰五肽移位酶的酶活性的測定方法,其包含下列步驟:(1)在適于酶活性發(fā)生的條件下培養(yǎng)反應(yīng)混合物,其包含,在含水介質(zhì)中,N-琥珀酰亞胺基[2,3-3H]丙酸酯取代的UDP-MurNAc-五肽,N-琥珀酰亞胺基丙酸酯取代的UDP-MurNAc-五肽(非-放射性的),二價金屬離子源,十一異戊二烯基磷酸酯源,去污劑和移位酶源;(2)在PH~4.2,用含季銨鹽的適當(dāng)緩沖液酸化反應(yīng)混合物,以終止步驟(1)的酶反應(yīng);和(3)提取所形成的任一十一異戊烯醇-焦磷酸酯-[2,3-3H]丙酸酯-N-乙酰胞壁酰五肽產(chǎn)物,并使用閃爍計數(shù)器測量放射性。
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摘要
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本發(fā)明提供一種檢測磷酸基-N-乙酰胞壁酰五肽移位酶的酶活性的測定方法,其包含下列步驟:(1)培養(yǎng)反應(yīng)混合物,其包含,在含水介質(zhì)中,N-琥珀酰亞胺基[2,3-3H]丙酸酯取代的UDP-MurNAc-五肽,N-琥珀酰亞胺基丙酸酯取代的UDP-MurNAc-五肽(非-放射性的),二價金屬離子源,十一異戊二烯基磷酸酯源,去污劑和移位酶源,在適于酶活性發(fā)生的條件下;(2)在pH~42,用含季銨鹽的適當(dāng)緩沖液酸化反應(yīng)混合物,以終止步驟(1)的酶反應(yīng);(3)提取所形成的任一十一異戊烯醇-焦磷酸酯-[2,3-3H]丙酸酯-N-乙酰胞壁酰五肽產(chǎn)物,并使用閃爍計數(shù)器測量放射性,且提供在其中使用的試劑盒。
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國際公布
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WO2000/065087 英 2000.11.2
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