| 公開(公告)號 | CN1526731A |
| 公開(公告)日 | 2004.09.08 |
| 申請(專利)號 | CN03158278.8 |
| 申請日期 | 2003.09.22 |
| 專利名稱 | 重組人紅細(xì)胞生成素的分離純化工藝 |
| 主分類號 | C07K14/505 |
| 分類號 | C07K14/505;C07K1/36 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 南京師范大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 胡云龍;張雙全 |
| 地址 | 210097江蘇省南京市寧海路122號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 南京知識律師事務(wù)所 |
| 代理人 | 栗仲平;王東升 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項 | 一種重組人紅細(xì)胞生成素的分離純化工藝，包括以下步驟：Blue sepharose.F.F層析：用PB緩沖液平衡Blue sepharose.F.F層析柱，用經(jīng)過微米膜過濾后細(xì)胞培養(yǎng)上清上樣，用PB緩沖液沖洗層析柱至基線，用20mM PB+0.75M NaCL緩沖液洗脫；金屬螯合親和柱層析用0.1M EDTA-Na2+1M NaCl平衡4.0C.V，用50％異丙醇+1％TFA平衡3.0C.V，用0.1M NaAc.HAC+0.2M CuSO4.5H2O平衡3.0C.V，用20mM PB+0.5M NaCl平衡3.0C.V，用Blue-Sepharose.F.F層析柱收集的洗脫蛋白峰上樣用20mM PB+0.5M NaCl沖洗，收集穿透液；Sephadex G-25(Medium)柱層析(7.5×70cm)用注射用水沖洗3.0C.V，用20mMTris-HCl(PH7.0)緩沖液平衡層析柱3.0C.V，用金屬螯合親和層析柱收集的穿透液上樣，用20mMTris-HCl(PH7.0)緩沖液洗脫，收集洗脫蛋白峰；Source Q柱層析(2.6×10cm)用20mMTris-HCl緩沖液平衡4.0C.V，用Sephadex G-25柱層析收集的洗脫蛋白峰上樣，用50mM NaCl/20mMTris-HCl緩沖液進行洗脫雜蛋白，用150mM NaCl/20mMTris-HCl緩沖液進行洗脫目的蛋白峰，收集目的蛋白峰經(jīng)過0.22微米膜過濾。 |
| 摘要 | 重組人紅細(xì)胞生成素的分離純化工藝，包括以下步驟：Blue sepharose.F.F層析；2.金屬螯合親和柱層析；3.Sephadex G-25柱層析；4.Source Q柱層析，收集目的蛋白峰經(jīng)過0.22微米膜過濾。本發(fā)明是一種低成本的重組人紅細(xì)胞生成素的生產(chǎn)方法。本工藝中不使用反相層析和有機溶劑，避免蛋白質(zhì)在層析過程中發(fā)生變性和有機溶劑的殘留。本工藝采用Blue Sepharose.FastFlow金屬螯和親和層析，Sephadex G-25層析和Source Q層析順序組合純化工藝路線，可以大規(guī)模制備藥用級的rHuEPO蛋白。 |
| 國際公布 |
