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膽汁中的生長因子和愈傷因子的分子組合藥物

公開(公告)號 CN1166687C  
公開(公告)日 2004.09.15  
申請(專利)號 CN98102581.1  
申請日期 1998.07.03  
專利名稱 膽汁中的生長因子和愈傷因子的分子組合藥物  
主分類號 C07K14/475  
分類號 C07K14/475;A61K35/413;A61K38/18  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 徐建興  
發(fā)明(設(shè)計)人 徐建興;康健  
地址 100101 北京市朝陽區(qū)大屯路15號中科院生物物理所  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構(gòu) 北京萬科園知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司  
代理人 張亞軍;曹詩健  
國省代碼 北京;11  
主權(quán)項 一種用生化方法從膽汁中制備的生長因子,它是糖蛋白,其特征在于:所分離的糖蛋白表觀分子量40-50KD,測得各項分析指標(biāo)如下:比旋光度:[α]20D=-11.7°(c0.35,H2O)糖含量(硫酸-苯酚法):4.7%蛋白含量(Folin-Lowry法):30.3%糖的組成和比例:L-李糖∶L-阿拉伯糖∶D-木糖∶D-甘露糖∶D-半乳糖為1.8∶14.0∶17.5∶4.0∶2.7;蛋白的基酸組成 氨基酸 含量 氨基酸 含量 牛黃酸 0.7天冬氨酸 7.7蘇氨酸 6.3絲氨酸 12.7谷氨酸 6.8甘氨酸 21.6丙氨酸 8.5纈氨酸 5.7異亮氨酸 5.9 亮氨酸 6.3氨酸 1.6苯丙氨酸 3.0鳥氨酸 4.0賴氨酸 1.7組氨酸 1.5精氨酸 3.5脯氨酸 2.5糖蛋白紅外IR特征峰:3400cm-1(OH或NH),2920cm-1(甲基),2850cm-1(甲氧基),1739.5cm-1(羰基),1469.6cm-1,1242.0cm-1,1105.0cm-1,964.2cm-1,842.8cm-1;核磁共振氫譜(1H-NMR): Chemical shiftsAssigrments(ppm) Chemical shiftsAssigments(ppm) 4.95(m) -O-CH-O4.82(m) -O-CH-O4.29(w)4.00(m) -CH2-O3.64(m) -CH2-O3.45(m) -CH2-O3.19(s) CH3-O-R 3.16(s) CH3-O-R2.12(m) CH3-CO-R2.00(m) C-CH2-C-O-1.50(s) C-CH2-C1.29(s) C-CH2-C0.94(s) CH3-C注:s強,m中,w弱,所述糖蛋白的分離制備方法如下:無菌條件下取出膽汁后于3000-5000轉(zhuǎn)離心20-30分鐘,所得上清液進行Sephadex柱層析分離可得一含糖和蛋白的混合峰,收集混合峰ERF再按下述方法進一步分離純化;方法1:待分離樣液先用乙酸分成沉淀和上清液兩部分,沉淀ERF-A難溶于水,易溶于乙醇,含糖量低于上清液部分;上清液ERF-B能溶于水,不溶于乙醇;ERF-B用DEAE-Sephadex A-25層析分離,結(jié)果分成四個組分:B1:定性檢測表明不是糖類;B2:保留時間21.4min;B3:主要含糖組分,有雜質(zhì),主要峰保留時間16.33min;B4:組成類似于B3;B3用Sephacryl S-300凝膠過濾法純化,主要組分用HPLC分析純度,結(jié)果表明在分離過程中發(fā)生了降解,可能是由于加入了乙醇引起的;B3為分離、純化的目的產(chǎn)物;方法2:ERF加熱溶于水后直接用DEAE-Sephadex A-25分離,所得到的ERF-3相應(yīng)于方法1中的B3;HPLC檢測純度為85%;收集方法1和2的含糖產(chǎn)物峰B3和ERF-3,再經(jīng)Sephacryl S-300柱層析可得到膽汁糖蛋白。  
摘要 本發(fā)明公開膽汁來源的生長因子:膽汁多糖、膽汁糖蛋白和膽汁多肽,它們具有刺激巨噬細胞和上皮細胞等多種細胞生長和增殖的能力。利用膽汁糖蛋白、膽汁多肽和膽汁多糖或它們與膽汁酸膽色素的分子組合制成愈傷因子可用醫(yī)療為目的,治療各種潰瘍、創(chuàng)傷、各種皮疹、炎癥和用于化妝品添加劑。  
國際公布  
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