| 公開(公告)號 | CN1175111C |
| 公開(公告)日 | 2004.11.10 |
| 申請(專利)號 | CN98804988.0 |
| 申請日期 | 1998.03.09 |
| 專利名稱 | 將基因整合至哺乳動物細(xì)胞特定位點的方法及所用載體 |
| 主分類號 | C12N15/90 |
| 分類號 | C12N15/90;C12N15/85;C12Q1/68;C12N5/10;C12N9/12;C12N15/13;C07K16/28;C12N15/12;C07K14/705;G01N33/53;C12N15/62;C07K19/00 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 1997.3.14 US 08/819,866; 1998.2.13 US 09/023,715 |
| 申請(專利權(quán))人 | 艾德藥品公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | M·E·雷夫;R·S·巴內(nèi)特 |
| 地址 | 美國加利福尼亞州 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | PCT/US1998/003935 1998.3.9 |
| 進(jìn)入國家日期 | 1999.11.11 |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 中國專利代理(香港)有限公司 |
| 代理人 | 盧新華;譚明勝 |
| 國省代碼 | 美國;US |
| 主權(quán)項 | 在分離的哺乳動物細(xì)胞基因組的靶位點插入所需DNA的方法，所述方法包括下列步驟：(i)用標(biāo)記質(zhì)粒轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化分離的哺乳動物細(xì)胞，所述質(zhì)粒含有下列序列：(a)對哺乳動物細(xì)胞基因組而言為異源的DNA區(qū)域，當(dāng)該區(qū)域整合至哺乳動物細(xì)胞基因組時，可為同源重組提供獨一無二的位點；(b)編碼第一個選擇標(biāo)記蛋白部分的第一部分的DNA片段；和(c)至少一種其它選擇標(biāo)記DNA，該DNA有助于選擇被標(biāo)記質(zhì)粒成功整合的哺乳動物細(xì)胞；(ii)通過篩選至少一種其它選擇標(biāo)記而選擇含有標(biāo)記質(zhì)粒的細(xì)胞，所述質(zhì)粒已整合至該細(xì)胞的基因組中；(iii)用靶向質(zhì)粒轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化所述選定細(xì)胞，所述質(zhì)粒含有下列序列：(a)DNA區(qū)域，該區(qū)域與標(biāo)記質(zhì)粒中獨一無二的區(qū)域相同或與其具有足夠的同源性以使所述DNA區(qū)域能經(jīng)由同源重組與所述獨一無二的區(qū)域重組；(b)編碼標(biāo)記質(zhì)粒中所含同一第一選擇標(biāo)記的第二部分的DNA片段，其中僅當(dāng)所述第二部分與第一選擇標(biāo)記蛋白的第一部分聯(lián)合表達(dá)時，才會產(chǎn)生第一選擇標(biāo)記蛋白；和(iv)通過篩選第一個選擇標(biāo)記蛋白的表達(dá)選擇出含有靶向質(zhì)粒的細(xì)胞，所述質(zhì)粒整合至靶位點。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及經(jīng)由同源重組將所需DNA位點特異性地整合至哺乳動物細(xì)胞靶位點的方法，此方法能可再現(xiàn)地選擇細(xì)胞系，在所述細(xì)胞系中，所需DNA被整合至已用標(biāo)記質(zhì)粒標(biāo)記的預(yù)定的轉(zhuǎn)錄活性位點。此方法特別適用于產(chǎn)生哺乳動物細(xì)胞系，所述細(xì)胞系可高水平分泌哺乳動物蛋白質(zhì)，尤其是免疫球蛋白。本發(fā)明也提供了此克隆方法中所用的載體和載體組合。 |
| 國際公布 | WO1998/041645 英 1998.9.24 |
