| 公開(公告)號 | CN1570089A |
| 公開(公告)日 | 2005.01.26 |
| 申請(專利)號 | CN200410018070.6 |
| 申請日期 | 2004.04.29 |
| 專利名稱 | 一種誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞定向分化的方法 |
| 主分類號 | C12N5/08 |
| 分類號 | C12N5/08 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 鐘春玖;劉康達(dá);王志軍 |
| 地址 | 200032上海市醫(yī)學(xué)院路136號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海正旦專利代理有限公司 |
| 代理人 | 包兆宜 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞定向分化的方法，其特征是，在無血清條件下，采用神經(jīng)節(jié)苷脂誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞定向分化成神經(jīng)前體(干)細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞，包括下述步驟，1)骨髓基質(zhì)細(xì)胞分離、純化和培養(yǎng)無菌條件取實(shí)驗(yàn)動物股骨，用d-Hank’s液沖洗骨髓，收集沖洗液并制成單細(xì)胞懸液、離心。用含20％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液懸浮沉淀的細(xì)胞、接種于培養(yǎng)瓶，37℃、5％CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。當(dāng)骨髓基質(zhì)細(xì)胞達(dá)80％融合時(shí)，用0.25％的胰酶消化傳代。以第四~六代骨髓基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行定向誘導(dǎo)、分化；2)、MSCs定向誘導(dǎo)更換培養(yǎng)液2天后換液并添加0.01~100mMol/L的神經(jīng)節(jié)苷脂，分別誘導(dǎo)；3)、MSCs和誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察；4)免疫細(xì)胞化學(xué)染色誘導(dǎo)細(xì)胞分別用巢蛋白、NSE、GFAP抗體進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光染色。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞定向分化為神經(jīng)干細(xì)胞、神經(jīng)前體細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞的方法。本發(fā)明方法通過骨髓基質(zhì)細(xì)胞分離、純化和培養(yǎng)，及誘導(dǎo)、分化，經(jīng)形態(tài)學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)染色證明，采用腦源性膜信號相關(guān)物質(zhì)一神經(jīng)節(jié)苷脂能高比例地誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞定向分化為神經(jīng)干細(xì)胞、神經(jīng)前體細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞。經(jīng)誘導(dǎo)后的神經(jīng)前體(干)細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞經(jīng)靜脈輸注移植或腦內(nèi)移植具有治療帕金森病或綜合征、中風(fēng)及其后遺癥、脊髓損傷及其后遺癥、阿爾茨海默病(老年性癡呆)等作用。具有廣泛臨床應(yīng)用前景。 |
| 國際公布 |
