以水溶性共軛聚合物為敏感材料的基因探針的構(gòu)建方法
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公開(公告)號
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CN1600866A
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公開(公告)日
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2005.03.30
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申請(專利)號
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CN200410053063.X
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申請日期
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2004.07.22
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專利名稱
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以水溶性共軛聚合物為敏感材料的基因探針的構(gòu)建方法
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主分類號
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C12Q1/68
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分類號
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C12Q1/68
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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復(fù)旦大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計)人
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黃維;陳國平;范曲立
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地址
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200433上海市邯鄲路220號
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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上海正旦專利代理有限公司
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代理人
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陸飛;沈云
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國省代碼
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上海;31
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主權(quán)項
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以水溶性共軛聚合物為敏感材料的基因探針的構(gòu)建方法，其特征是以水溶性共軛聚合物為熒光指示劑，以核酸肽PNA為分子識別元件，通過一段線性的DNA單鏈將核酸肽PNA結(jié)合到水溶性共軛聚合物上；其步驟如下：(1)石英玻璃表面清洗后進(jìn)行活化處理；(2)通過自組裝或者共價鍵方法在石英玻璃上固定帶正電荷的水溶性共軛聚合物；(3)設(shè)計并合成單鏈DNA作為捕捉探針DNA；(4)設(shè)計并合成核酸肽PNA分子鏈作為分子識別元件；(5)將(4)得到的核酸肽PNA分子的5′端通過共價鍵連接的方法連接上水溶性共軛聚合物的熒光猝滅劑；(6)將步驟(3)得到的捕捉探針DNA和步驟(5)得到的PNA按照摩爾比為0.9∶1～1∶0.9關(guān)系配置成混合溶液；(7)將步驟(2)所得的固定有水溶性共軛聚合物的玻璃放置于步驟(6)所得的混合溶液中，控制溫度使得捕捉探針DNA與PNA分子雜交，同時捕捉探針DNA通過靜電作用與(2)得到水溶性共軛聚合物結(jié)合在一起，從而將PNA分子錨定于石英玻璃表面上的水溶性共軛聚合物上；(8)取出玻璃后做進(jìn)一步干燥處理，即得到針對特定堿基序列的目標(biāo)單鏈的探針。
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摘要
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本發(fā)明涉及一種以水溶性共軛聚合物為敏感材料的基因探針的構(gòu)建方法。它以水溶性共軛聚合物為敏感材料，以核酸肽PNA為分子識別元件，以DNA單鏈作為捕捉探針；將核酸肽PNA結(jié)合到水溶性共軛聚合物上，連接于PNA分子上的熒光猝滅劑導(dǎo)致水溶性共軛聚合物熒光猝滅，PNA分子與目標(biāo)單鏈雜交后，使得PNA分子上的熒光猝滅劑離開水溶性共軛聚合物，水溶性共軛聚合物熒光恢復(fù)，從而實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)單鏈的檢測。本發(fā)明簡化了探針的構(gòu)建方法，使得線性探針容易與目標(biāo)單鏈雜交結(jié)合，可廣泛運(yùn)用于分子生物學(xué)、臨床診斷及各種生化分析。
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國際公布
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