寡核苷酸芯片及其在乙型肝炎病毒突變位點(diǎn)檢測(cè)中的應(yīng)用

醫(yī)藥數(shù)據(jù)庫中心藥學(xué)論壇

公開(公告)號(hào)

CN1200115C

公開(公告)日

2005.05.04

申請(qǐng)(專利)號(hào)

CN02135625.4

申請(qǐng)日期

2002.10.14

專利名稱

寡核苷酸芯片及其在乙型肝炎病毒突變位點(diǎn)檢測(cè)中的應(yīng)用

主分類號(hào)

C12Q1/68

分類號(hào)

C12Q1/68

分案原申請(qǐng)?zhí)?

優(yōu)先權(quán)

申請(qǐng)(專利權(quán))人

山東省醫(yī)藥生物技術(shù)研究中心

發(fā)明(設(shè)計(jì))人

魯艷芹;韓金祥

地址

250062 山東省濟(jì)南市經(jīng)十路89號(hào)

頒證日

國(guó)際申請(qǐng)

進(jìn)入國(guó)家日期

專利代理機(jī)構(gòu)

濟(jì)南三達(dá)專利事務(wù)所

代理人

孫君

國(guó)省代碼

山東;37

主權(quán)項(xiàng)

一種寡核苷酸芯片，包括玻璃基片和陣列式分布的寡核苷酸探針與對(duì)照的點(diǎn)涂層，所述的點(diǎn)涂層是在玻璃基片上均勻分布的、含有包括乙肝前核心抗原區(qū)和表面抗原區(qū)已知的12個(gè)突變位點(diǎn)和其相對(duì)應(yīng)的野生位點(diǎn)的72條寡核苷酸探針，其特征在于，所述的72條寡核苷酸探針包含的12個(gè)突變位點(diǎn)是，乙肝表面抗原區(qū)已知的5個(gè)突變位點(diǎn)：546C-T、551A-G、552T-C、585A-C、587G-A；前核心抗原區(qū)7個(gè)已知的突變位點(diǎn)：1896G-A、1762A-T與1764G-A聯(lián)合突變、1858C-T、1862G-T、1898G-A、1899G-A、1901G-A；所述寡核苷酸探針?biāo)陉嚵信c對(duì)照的點(diǎn)涂層的大小，可以根據(jù)點(diǎn)的大小，點(diǎn)間距的變化而變化，陣列的排列和分布數(shù)量可以根據(jù)待分析樣品的數(shù)目而變化；所述寡核苷酸探針點(diǎn)直徑為100μm，點(diǎn)間距為300μm，寡核苷酸探針?biāo)陉嚵信c對(duì)照點(diǎn)涂層大小為2.2mm×2.5mm；上述72條寡核苷酸探針序列如下：

位點(diǎn)

編號(hào)

探針序列

長(zhǎng)度

Tm值

GC％

546

5′NH2-(CH2)6-T15-ACTCCTGCTCAAGGAA3′

66.9

5′NH2-(CH2)6-T15-ACTCCTGCTCAAGGAAC3′

52.9

5′NH2-(CH2)6-T15-ACTCCTGCTCAAGGAAT3′

67.6

47.1

5′NH2-(CH2)6-T15-AAGAGGGAAACATAGAG3′

65.1

41.2

5′NH2-(CH2)6-T15-AAGAGGGAAACATAGAGG3′

68.1

44.4

5′NH2-(CH2)6-T15-AAGAGGGAAACATAGAGA3′

65.8

38.9

551

5′NH2-(CH2)6-T15-TGCTCAAGGAACCTCT3′

66.9

摘要

寡核苷酸芯片及其在乙型肝炎病毒突變位點(diǎn)檢測(cè)中的應(yīng)用，屬于基因芯片技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的寡核苷酸檢測(cè)芯片，包括玻璃基片和陣列式分布的寡核苷酸探針與對(duì)照的點(diǎn)涂層，所述的寡核苷酸探針共72條，包含有乙肝前核心抗原區(qū)和表面抗原區(qū)已知的12個(gè)突變位點(diǎn)和其相對(duì)應(yīng)的野生位點(diǎn)。以玻璃基片上的寡核苷酸探針作為固相引物，乙肝病毒DNA作為模板，三對(duì)液相引物混合后，通過熒光標(biāo)記的Cy3-dCTP進(jìn)行固相PCR擴(kuò)增。根據(jù)寡核苷酸芯片上不同位點(diǎn)熒光信號(hào)的強(qiáng)弱來分析突變位點(diǎn)。本發(fā)明集寡核苷酸芯片和固相PCR于一體，具有快速、高效、準(zhǔn)確、平行診斷的特點(diǎn)。

國(guó)際公布

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