| 公開(公告)號 | CN1616653A |
| 公開(公告)日 | 2005.05.18 |
| 申請(專利)號 | CN200410092831.2 |
| 申請日期 | 2004.11.12 |
| 專利名稱 | 篩選轉(zhuǎn)基因動物細胞陽性單克隆方法 |
| 主分類號 | C12N5/10 |
| 分類號 | C12N5/10;C12Q1/04 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2004.9.20 CN 200410083047.5 |
| 申請(專利權(quán))人 | 新疆金牛生物股份有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 王亮;朱海;呂自力;劉婷婷;帥志強;彭濤 |
| 地址 | 830026新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)校院路15號金牛公司科學(xué)院 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 烏魯木齊合縱專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 湯建武 |
| 國省代碼 | 新疆;65 |
| 主權(quán)項 | 一種篩選轉(zhuǎn)基因動物細胞陽性單克隆方法，其特征在于按下述步驟進行：第一步，在培養(yǎng)液中對需要轉(zhuǎn)基因的動物細胞進行培養(yǎng)，待其動物細胞聚合至40％至80％后，進行基因轉(zhuǎn)染；第二步，在基因轉(zhuǎn)染后進行1天至7天的動物細胞生長恢復(fù)，然后用能致死非基因轉(zhuǎn)染動物細胞的濃度的新霉素進行5天至20天篩選；第三步，在第二步致死性篩選后，使用轉(zhuǎn)基因動物細胞維持生長濃度的新霉素，再加入離心收集的該動物細胞對數(shù)生長期含有生長因子培養(yǎng)液，在此條件下，在培養(yǎng)液中進行2天至14天的動物細胞培養(yǎng)擴增；第四步，當(dāng)?shù)谌街械年栃赞D(zhuǎn)基因動物細胞生長形成克隆后，用細胞刮刀刮除正常細胞，保留轉(zhuǎn)基因陽性動物細胞克��；第五步，挑選和標記選定的轉(zhuǎn)基因動物細胞陽性單克隆，用0.125％至0.25％胰酶或EDTA-胰酶定點消化該單克隆細胞并將消化后的陽性單克隆細胞迅速置入新的培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)擴增，培養(yǎng)擴增至50％--80％的細胞聚合，用0.125％至0.25％濃度的胰酶或EDTA-胰酶消化和懸浮上述所培養(yǎng)擴增的陽性轉(zhuǎn)基因單克隆動物細胞，加入培養(yǎng)液和致死非基因轉(zhuǎn)染動物細胞的濃度的新霉素，繼續(xù)培養(yǎng)細胞，在致死非基因轉(zhuǎn)染動物細胞的濃度的新霉素和胰酶或EDTA-胰酶作用下，在培養(yǎng)液中致死殘留的非基因轉(zhuǎn)染動物細胞；第六步，將第五步所得到陽性單克隆動物細胞再植入新的培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)，在陽性轉(zhuǎn)基因動物細胞維持生長的濃度的新霉素條件下，再加入離心收集的該細胞對數(shù)生長期含有生長因子培養(yǎng)液的條件下，即可得到大量的純化的轉(zhuǎn)基因陽性單克隆動物細胞。 |
| 摘要 | 一種篩選轉(zhuǎn)基因動物細胞陽性單克隆方法，其按下述步驟進行：第一步，對需要轉(zhuǎn)基因的動物細胞進行培養(yǎng)，并進行基因轉(zhuǎn)染；第二步，用能致死非基因轉(zhuǎn)染動物細胞的濃度的新霉素進行篩選；第三步，轉(zhuǎn)基因動物細胞陽性克隆的培養(yǎng)擴增；第四步，刮除非基因轉(zhuǎn)染動物細胞，保留轉(zhuǎn)基因動物細胞陽性克��；第五步，挑選轉(zhuǎn)基因動物細胞陽性單克隆并培養(yǎng)擴增，致死殘留的非基因轉(zhuǎn)染動物細胞；第六步，進一步培養(yǎng)擴增得到大量的轉(zhuǎn)基因動物陽性單克隆細胞。本發(fā)明的特點：省時省工，效率高，并且大大降低了篩選轉(zhuǎn)基因動物細胞陽性單克隆的成本。同時該方法適用于商業(yè)上具有經(jīng)濟價值的轉(zhuǎn)基因動物細胞陽性單克隆的篩選，是制作轉(zhuǎn)基因動物的必要手段之一。 |
| 國際公布 |
