| 公開(公告)號 | CN1308444C |
| 公開(公告)日 | 2007.04.04 |
| 申請(專利)號 | CN200510064436.8 |
| 申請日期 | 2005.04.15 |
| 專利名稱 | 基因重組α-半乳糖苷酶大批量發(fā)酵液的純化方法 |
| 主分類號 | C12N9/40(2006.01)I |
| 分類號 | C12N9/40(2006.01)I;C07K1/18(2006.01)I;C07K1/20(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院野戰(zhàn)輸血研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 章?lián)P培;高紅偉;鮑國強;高 新;宮 鋒;王穎麗;田曙光 |
| 地址 | 100850北京市海淀區(qū)太平路27號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 魯 兵 |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項 | 一種基因重組α-半乳糖苷酶大批量發(fā)酵液的純化方法，其特征在于，包括將所述發(fā)酵液依次經(jīng)過陽離子交換層析和疏水層析兩步得到純度為98％以上的重組α-半乳糖苷酶的過程，具體包括以下步驟：1)發(fā)酵液預(yù)處理：將所述發(fā)酵液通過高速離心回收上清液，用0.2M，pH4.0的磷酸-檸檬酸緩沖液將上清液的pH值調(diào)到4.0；2)陽離子交換：a.以STREAMLINE-SP柱作為陽離子交換層析柱，用1N的NaOH溶液由下向上洗STREAMLINE-SP柱，再用水洗至pH為中性；b.用平衡緩沖液平衡STREAMLINE-SP柱，所述平衡緩沖液為pH4.0的20mM的檸檬酸-磷酸鹽緩沖液；c.平衡后上樣，用平衡緩沖液由下向上洗掉雜蛋白；d.改變流路，待填料沉積后先用含0.07MNaCl的檸檬酸-磷酸鹽緩沖液由上向下洗雜蛋白，再用含0.5MNaCl的檸檬酸-磷酸鹽緩沖液由上向下進(jìn)行洗脫，收集第一洗脫液；3)疏水層析：a.用50mM、pH6.0、含1M硫酸銨的檸檬酸-磷酸鹽緩沖液即HIC平衡緩沖液平衡HiTrap Phenyl HP柱3-5個柱體積，流速20ml/min；b.向第一洗脫液中加入3M硫酸銨溶液和pH6.0的200mM檸檬酸-磷酸鹽緩沖液貯存液使之與HIC平衡緩沖液離子強度一致；c.平衡后上樣，流速20ml/min；d.用HIC平衡緩沖液洗掉雜蛋白；e.用pH6.0、含0.4M硫酸銨的50mM檸檬酸-磷酸鹽緩沖液作洗脫液進(jìn)行洗脫，收集第二洗脫液；該第二洗脫液得到的為純度98％以上的重組α-半乳糖苷酶。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種基因重組α-半乳糖苷酶發(fā)酵液的純化方法，該方法將發(fā)酵液經(jīng)過陽離子交換層析和疏水層析兩步工序，即可得到蛋白純度大于98％的基因重組α-半乳糖苷酶，為規(guī)模化生產(chǎn)高純度的重組α-半乳糖苷酶提供了解決方案，并且純化后的基因重組α-半乳糖苷酶內(nèi)毒素小于10EU，無熱源，可用于B→O血型改造、食品添加劑、化工和制藥等領(lǐng)域。 |
| 國際公布 |
