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一種篩選結(jié)核桿菌耐多藥蛋白的方法

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1952168A  
公開(kāi)(公告)日 2007.04.25  
申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào) CN200610117754.0  
申請(qǐng)日期 2006.10.30  
專(zhuān)利名稱(chēng) 一種篩選結(jié)核桿菌耐多藥蛋白的方法  
主分類(lèi)號(hào) C12Q1/04(2006.01)I  
分類(lèi)號(hào) C12Q1/04(2006.01)I;C12Q1/18(2006.01)I;G01N27/26(2006.01)I;G01N30/72(2006.01)I;G01N33/68(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人 復(fù)旦大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 王洪海;王慶忠;張 鷺;樂(lè) 軍;張 旻;徐 穎;祝秉東;王九齡;郄亞卿  
地址 200433上海市邯鄲路220號(hào)  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu) 上海正旦專(zhuān)利代理有限公司  
代理人 姚靜芳  
國(guó)省代碼 上海;31  
主權(quán)項(xiàng) 一種篩選結(jié)核桿菌耐多藥蛋白的方法,其特征在于,所述藥物是3-{[(4-甲基-1-哌嗪基)亞基]甲基}-利福霉素、4-吡啶甲酰肼-異煙肼、{2R,2[S-(R*,R*)]-R}-(+)2,2′-(1,2-乙二基二亞氨基)-雙-1-丁醇二鹽酸鹽-乙胺丁醇、0-2-甲氨基-2-脫-α-L-葡吡喃糖基-(1→2)-0-5-脫氧-3-C-甲;-α-L-來(lái)蘇呋喃糖基-(1→4)-N1,N3-二脒基-D-鏈霉胺硫酸鹽-鏈霉素和吡嗪甲酰胺-吡嗪酰胺;該方法包括以下步驟: (1)在臨床結(jié)核桿菌分離株中篩選耐多藥菌株,以對(duì)五種藥物同時(shí)滿足最低抑菌濃度高于相應(yīng)臨界耐藥濃度的菌株為耐多藥菌株;五種藥物的臨界耐藥濃度分別為:3-{[(4-甲基-1-哌嗪基)亞氨基]甲基}-利福霉素為16μg/ml,4-吡啶甲酰肼-異煙肼為2μg/ml,{2R,2[S-(R*,R*)]-R}-(+)2,2′-(1,2-乙二基二亞氨基)-雙-1-丁醇二鹽酸鹽-乙胺丁醇為4μg/ml,0-2-甲氨基-2-脫氧-α-L-葡吡喃糖基-(1→2)-0-5-脫氧-3-C-甲;-α-L-來(lái)蘇呋喃糖基-(1→4)-N1,N3-二脒基-D-鏈霉胺硫酸鹽-鏈霉素為8μg/ml,吡嗪甲酰胺-吡嗪酰胺為16μg/ml;以相同條件下不加藥培養(yǎng)的結(jié)核桿菌標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)株、臨床敏感菌株為對(duì)照; (2)分別分離標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)株、臨床敏感菌株和耐多藥菌株中的蛋白; (3)以耐多藥菌株中,相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)株和臨床敏感菌株,增加或者缺失的蛋白,或者表達(dá)量增加至少2倍的蛋白,或者表達(dá)量減少至少50%的蛋白為耐多藥蛋白; (4)分離鑒定耐多藥蛋白。  
摘要 本發(fā)明屬于分子生物學(xué)篩選新型抗結(jié)核藥靶、疫苗抗原和檢測(cè)新標(biāo)志物領(lǐng)域,具體的說(shuō),本發(fā)明提供了一種篩選結(jié)核桿菌耐利福平藥物的蛋白的方法:首先,培養(yǎng)耐多藥菌株;其次,分別分離耐多藥菌株和敏感菌株中的蛋白;再次,將耐多藥菌株和敏感菌株中的蛋白進(jìn)行對(duì)比,確定耐多藥蛋白;最后,分離鑒定耐多藥蛋白。本發(fā)明提供的方法可以準(zhǔn)確分離鑒定結(jié)核桿菌耐多藥蛋白,為深入了解結(jié)核桿菌的耐多藥機(jī)理、臨床耐多藥株的快速檢測(cè)及疫苗、藥靶的開(kāi)發(fā)提供新的途徑。  
國(guó)際公布  
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