黃連上清丸—黃芩苷的測(cè)定—高效液相色譜法 2

本方法采用反相高效液相色譜法測(cè)定黃連上清丸中黃芩苷的含量。

將供試品用甲醇超聲提取，加入甲醇定容，過濾，續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取供試品液10µL，分別注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)274nm處檢測(cè)黃芩苷吸收值，以外標(biāo)法計(jì)算含量。

1. 甲醇（色譜純)

2. 醋酸

1 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

Hybersil ODS柱 (200 × 4.6mm，5µm)。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：甲醇 水 醋酸 = 40 60 1

2.2 流速：1.0mL/min

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)：274nm

2.4 柱溫：30℃

1. 稱取供試品

精密稱取研細(xì)的本品粉末1.5g。

2. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品(60℃減壓干燥4h)12.5mg，置25mL量瓶中，加50%甲醇適量，振搖，使對(duì)照品溶解，用50％甲醇稀釋至刻度，搖勻。超聲除去氣泡，用50%甲醇至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液2.0mL置10mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，用0.45µm微孔濾膜過濾，制成每1mL含黃芩苷0.1µg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0mL分別置10mL量瓶中，用50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4.供試品溶液的制備

將供試品精密加入50%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，用50％甲醇補(bǔ)足減失重量，用0.45µm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液10µL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)274nm處測(cè)定黃芩苷的吸收值，每個(gè)濃度點(diǎn)進(jìn)樣2次測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣量對(duì)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

2. 供試品的測(cè)定

精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液10µL，分別注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)274nm處測(cè)定黃芩苷的吸收值，用外標(biāo)法計(jì)算出其含量。

姜紅，董潤(rùn)芬，崔萍. RPHPLC法測(cè)定黃連上清丸中黃芩苷的含量. 天津藥學(xué)，2002，14(3)：72-73.