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1.2.5 受精、原核形態(tài)學及原核構(gòu)型的評估
取卵4～6h后對成熟卵子進行受精，16～18h后對卵母細胞的受精情況進行檢查。在本研究中，當有兩個清晰的原核出現(xiàn)時，確認為卵母細胞已受精。并對合子原核進行評分[6]，同時評估原核與極體的構(gòu)型關系。
對原核構(gòu)型的評估采用如下方法：將合子置于覆蓋石蠟油的MHTF微滴中，用一根細玻璃管輕輕撥動使其旋轉(zhuǎn)，以便使極體位于6點鐘的位置且原核清晰可見，不重疊。這項操作總共不超過15s，且對胚胎不會造成損傷。對原核的構(gòu)型及形態(tài)學進行分析并記錄，在原核構(gòu)型的基礎上分為以下四種類型：PN1、PN2、PN3和PN4。PN1型合子其構(gòu)型為兩原核位于10：20或03：50的位置，PN2型合子其構(gòu)型為兩原核位于01：40或08：10的位置，PN3型合子其構(gòu)型為兩原核位于06：00或12：30的位置，PN4型合子其構(gòu)型為兩原核位于02：45或09：15的位置。
在移植入子宮之前，我們對以上種類合子進行進一步的評估，分別對受精后24～26、48、72及120h后的胚胎發(fā)育進行評估。根據(jù)第3天胚胎的形態(tài)學特征進行移植胚胎的選擇，在有多余可供選擇胚胎的前提下，盡可能選擇某一種原核構(gòu)型和早期卵裂的胚胎，后移入子宮，同時進行黃體支持。
在移植后14d，對血hCG水平進行測定，陽性者定為生化妊娠;移植后25～30d，在B超下鑒定是否有孕囊及胎心出現(xiàn)，均有則視為臨床妊娠。
1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
實驗數(shù)據(jù)以均值±標準差(Mean±SD)表示。采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行顯著性檢驗。P<0.05為差異顯著。
2 結(jié)果
2.1 四種不同構(gòu)型來源的胚胎早期卵裂、優(yōu)質(zhì)胚胎、囊胚率的比較
1 375個卵母細胞中,正常受精的有1 032個(除去未成熟、未受精及異常受精的卵子)納入本研究。在IVF和ICSI病人之間，不同原核構(gòu)型的比例、受精、卵裂、優(yōu)胚率及種植懷孕率之間沒有顯著的差異。具體結(jié)果如表1所示,由表中可以看出:合子原核構(gòu)型主要有四種，依次為PN1(29.58%)，PN2(27.67%)，PN3(22.38%)及PN4(20.37%)。與PN2，PN3相比，PN1，PN4來源的胚胎其早期卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率及囊胚率均顯著增加(P<0.05),PN2和PN3之間差異均不顯著(P>0.05)。
2.2 原核構(gòu)型、早期卵裂與種植率和懷孕率之間的關系
不同原核構(gòu)型的合子，其早期卵裂率與種植率和懷孕率之間的關系如表2所示，由表中可以看出，與PN2、PN3構(gòu)型的合子相比，PN1和PN4構(gòu)型的合子其早期卵裂率顯著增高(P<0.05),移植PN1、PN4構(gòu)型和早期卵裂的胚胎其種植率和懷孕率均顯著升高(P<0.05)。PN2和PN3之間各項差異均不顯著(P>0.05)。表1 四種不同構(gòu)型來源的胚胎早期卵裂、優(yōu)質(zhì)胚胎、囊胚率的比較注：與PN2相比^P<0.05，與PN3相比△P<0.05表2 原核構(gòu)型、早期卵裂與種植率和懷孕率之間的關系注：與PN2相比^P<0.05，與PN3相比△P<0.05
3 討論
胚胎在子宮中能否進行著床并發(fā)育，取決于很多因素，包括胚胎質(zhì)量的好壞，子宮內(nèi)膜的容受性及胚胎的染色體倍性等遺傳學因素是否正常等[7]，選擇什么樣的胚胎進行移植是關系到IVF成功與否的關鍵因素之一。因此，能夠預示胚胎發(fā)育潛力的一些標準變的越來越重要。因而有很多學者從多方面探索一些與胚胎發(fā)育和妊娠有關的因素，如受精卵原核的形態(tài)及核仁分布及多少，胚胎卵裂的時間，原核與極體的構(gòu)型關系及是否出現(xiàn)胞漿暈，第3天8細胞胚胎的數(shù)量及胚胎的碎片程度等[8]。其中方叢(2006)研究表明移植早期卵裂胚胎可以提高IVFET的成功率，并提高妊娠率[9]。由于原核對胚胎的進一步發(fā)育及種植和懷孕有一定的預示作用，所以在近來的一些研究中，原核的形態(tài)學引起了廣泛的關注。在卵裂之前，原核必須平行于極體[10]，因此我們可以推測原核的構(gòu)型對卵裂的發(fā)生一定存在某種作用，已報道在合子卵裂前，原核將向第二極體方向旋轉(zhuǎn)為合子卵裂做好準備[11]。因此，本實驗通過原核構(gòu)型與早期卵裂來評估胚胎的質(zhì)量，以期提高試管嬰兒的效率。
