醫(yī)學(xué)免費論文:HPV16�睧6蛋白在宮頸病變組織中的表達及臨床應(yīng)用

1.2 檢測方法 采用鏈霉素抗生物素蛋白�策^氧化物酶聯(lián)結(jié)免疫組化(SP)法進行實驗檢測�；�本原理是采用生物素標記的第二抗體與鏈霉菌抗生物素蛋白連接的過氧化物酶及基質(zhì)素混合液來測定細胞和組織中的抗原。鼠抗人HPV16�睧6單克隆抗體、即用型鼠SP kate檢測試劑、DAB顯色試劑盒、SP試劑盒均為北京中山生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。本實驗染色程序嚴格按SP染色試劑盒說明書操作。

1.3 免疫組化結(jié)果判斷標準 根據(jù)文獻，按陽性細胞百分比及陽性細胞染色強弱評分(immunohistochemical scores，IHS)[5]： IHS=a×b。a代表陽性細胞百分比：a=0，無陽性細胞;a=1，陽性細胞為1%～10%;a=2，陽性細胞為11%～50%;a=3，陽性細胞為51%～80%;a=4，陽性細胞為81%以上。b 代表陽性細胞染色強弱：b=0，陰性;b=1，弱陽性;b=2，中度陽性;b=3，強陽性。IHS 0分為(-);IHS 1～4分為(+);IHS 5～8分為(++);IHS 9～12分為(+++)。HPV16�睧6蛋白陽性細胞以胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為主，部分出現(xiàn)在胞漿中。每張切片均以IHS評價得分情況。每批染色均同步設(shè)立對照，以PBS液代替一抗為陰性空白對照。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SAS 8.1統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗、確切概率法、多個樣本率比較的χ2分割法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV16�睧6蛋白在不同宮頸病變組織中的表達 HPV16�睧6染色陽性以胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為主，部分出現(xiàn)在胞漿中，其在正常宮頸、宮頸炎、CIN、宮頸癌各組中的陽性表達率分別為0.5%、38.35%、46.15%、71.11%，4組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=27.50，P<0.01)。經(jīng)χ2分割后比較(α′=0.007143)，宮頸癌組的陽性率明顯高于宮頸炎組及正常宮頸組(χ2=11.95，P=0.0005;χ2=25.21，P<0.01)。CIN組明顯高與正常宮頸組(χ2=9.95，P=0.0016)。宮頸炎組明顯高于正常宮頸組(χ2=8.63， P=0.0033)。而宮頸癌組與CIN組，CIN組與宮頸炎組陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.35， P=0.0369;χ2=0.4841，P=0.4866)。CIN組及宮頸炎組內(nèi)重度病變陽性率明顯高于輕度病變(χ2=11.17，P=0.0008)。見表1、2。表1 HPV16�睧6在 CC、CIN、Cc正常宮頸組織中表達比較　表2 χ2分割后HPV16�睧6陽性表達率比較

2.2 HPV16�睧6蛋白的表達與宮頸癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系 HPV16�睧6的陽性率在宮頸癌組織中的表達與組織學(xué)分級、臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑、肌層浸潤深度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。在<45歲和≥45歲患者中分別為57.65%、89.47%，二者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.39，P<0.05); 在鱗癌與非鱗癌中分別為88.24%、18.18%，二者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=16.59，P<0.05);有宮旁或脈管浸潤與無宮旁或脈管浸潤的組織中分別為89.47%、57.69%，二者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.40，P<0.05)。見表3。表3 HPV16�睧6蛋白表達與宮頸癌的關(guān)系和臨床病理特征

3 討論

HPV為乳多空病毒科A屬成員，由無被膜的正20面體構(gòu)成病毒殼體，是7 900 bp環(huán)狀、雙鏈、右手螺旋、嗜上皮性的DNA病毒[6]。錢元淑等[7]用PCR法檢測HPV16/18在宮頸癌及其癌前病變中的表達情況。結(jié)果顯示：HPV16/18陽性率在正常宮頸到宮頸炎、CIN、再到宮頸癌有逐漸升高趨勢。宮頸癌組與CIN組、CIN Ⅲ與CINⅠ～Ⅱ級、中重度宮頸炎組與輕度宮頸炎組差異有統(tǒng)計學(xué)意義。本研究中用χ2分割法處理后，宮頸癌組陽性率顯著高于宮頸炎組及正常宮頸組，CIN組和宮頸炎組陽性率顯著高于正常宮頸組。提示：從正常宮頸向CIN及宮頸癌的轉(zhuǎn)化是一個漸進的過程，而高危型HPV16感染是宮頸細胞惡性轉(zhuǎn)化的重要因素，是宮頸病變發(fā)生的早期事件。本實驗中，經(jīng)χ2分割后，宮頸癌組與CIN組的陽性率無統(tǒng)計學(xué)意義，分析可能與CIN組樣本例數(shù)少有關(guān)，但CIN Ⅲ級顯著高于CINⅠ～Ⅱ級，中重度宮頸炎顯著高于輕度宮頸炎，提示：HPV16感染在宮頸病變早期發(fā)揮作用，且陽性率有逐漸增高趨勢。與文獻報道[8，9]結(jié)果相似。目前大量研究發(fā)現(xiàn)：高危型HPV DNA整合[10]到宿主基因組將導(dǎo)致宿主細胞產(chǎn)生抑癌基因功能缺陷、基因組不穩(wěn)定性和細胞永生化等一系列不可逆的鏈式反應(yīng)，是宮頸癌變的重要機制之一。高危型HPV從腫瘤的啟動、發(fā)生、發(fā)展及惡性表型的全過程都密切相關(guān)。由此可見，HPV16感染在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本研究顯示：在宮頸癌組織中HPV16�睧6蛋白的陽性表達率與宮旁或脈管浸潤有關(guān)(P<0.05)。關(guān)于HPV感染對宮頸癌侵襲能力的報道較少。研究顯示：與HPV感染相關(guān)的高級鱗狀上皮內(nèi)病變及惡性腫瘤中E6和E7蛋白的表達水平顯著提高，表明E6和E7蛋白的表達水平與病變的進展程度及細胞的惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)。特定的HPV16�睧6變異可能具有較高的宮頸癌患病風險[11]。諸多研究證明端粒酶的激活與宮頸異型增生和宮頸癌的進展過程有關(guān)[12-14]。HPV16�睧6可提高端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase， hTERT)mRNA的水平，激活端粒酶，是CIN向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)化過程中的關(guān)鍵步驟，其陽性表達率隨宮頸癌前病變的進展逐漸升高，與宮頸癌的級別呈正相關(guān)[15]。同所有實體腫瘤一樣，宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移呈明顯的血管依賴性。血管內(nèi)皮生長因子�睠(vascular endothelial growth factors C，VEGF�睠)在多種腫瘤細胞中表達，具有誘導(dǎo)血管和淋巴管生成的潛能，促進腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。多項研究顯示[16-18]：VEGF�睠與高危型HPV癌蛋白在宮頸癌中的表達呈正相關(guān)，推測高危型HPV可能在整合入宮頸上皮細胞DNA后，通過促進宮頸上皮高表達VEGF�睠導(dǎo)致腫瘤內(nèi)及癌旁組織新生血管及淋巴管的形成，從而促進宮頸癌的侵襲轉(zhuǎn)移。上述因素協(xié)同作用，促進病毒基因組的復(fù)制和繁殖，使含有整合狀態(tài)的病毒癌基因的細胞不斷的增殖。這與本研究HPV16�睧6蛋白與宮旁或脈管浸潤有關(guān)一致。提示：高危型HPV E6蛋白在促進宮頸上皮癌變過程中扮演重要角色，HPV16在宮頸癌的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮一定作用醫(yī).學(xué).全.在.線gydjdsj.org.cn。

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