醫(yī)學(xué)論文范文:存活素siRNA表達(dá)質(zhì)粒對化療藥物抑癌作用的影響

醫(yī)學(xué)論文范文:存活素siRNA表達(dá)質(zhì)粒對化療藥物抑癌作用的影響

【摘要】 目的 利用復(fù)乳�踩軇�揮發(fā)法制備脂質(zhì)體,并考察其對水溶性藥物氧化苦參堿的包封率。 方法 按文獻(xiàn)利用高速剪切機(jī)制備水相溶有氧化苦參堿的W/O乳劑,再將此乳劑滴入水相中二次乳化并繼續(xù)快速攪拌、揮干溶劑即得。并且采用超濾�睭PLC法測定了脂質(zhì)體的包封率。 結(jié)果 復(fù)乳法制備的脂質(zhì)體包封率較低,絕大多數(shù)情況小于10%,當(dāng)水化液的離子強度較高時包封率在15%左右,樣品低溫儲存2周后有藥物晶體析出。 結(jié)論 采用復(fù)乳法制得氧化苦參堿脂質(zhì)體包封率較低,與文獻(xiàn)報道的情形相符。

【關(guān)鍵詞】 脂質(zhì)體;復(fù)乳�踩軇�揮發(fā)法;氧化苦參堿;大豆磷脂;包封率

Preparation of liposomal oxymatrine by multiple emulsification�瞫olvent evaporation method

WANG Hao1,GU Ji�瞛in2,DENG Ying�瞛ie3

(1.School of Pharmacy,Central South University,Changsha 410013,China;2.School of Pharmacy,Fudan University,Shanghai 201203,China;3.School of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110016,China)

【Abstract】 Objective To prepare liposomal oxymatrine by multiple emulsificating�瞫olvent evaporating process.Methods W/O emulsion that contained oxymatrine was prepared by employing high�瞫peed homogenizer.Liposomal oxymatrine was obtained by adding the W/O emulsion into aqueous media dropwise and stirring the mixture vigorously until the organic solvent was evaporated thoroughly.10 times higher of phospholipid concentration was used compared to that reported in literature.Ultrafiltration�睭PLC method is adopted to determine the encapsulation efficiency of oxymatrine liposome.Results The encapsulation efficiency was rather low by employing multiple emulsificating and solvent evaporating method that it was below 10% in most cases but some cases around 15%.Drug crystal could be found after the samples were stored 4 ℃ for 2 weeks.Conclusion The result is accordant with the reports in references that water�瞫oluble small molecular compound could be difficultly loaded in liposome with high encapsulation efficiency by the method adapted.醫(yī)學(xué) 全在.線提供www.gydjdsj.org.cn

【Key words】 liposome;multiple emulsification�瞫olvent evaporation;oxymatrine;soybean phospholipids;encapsulation efficiency

氧化苦參堿(oxymatrine,OMT)是從中藥苦參和苦豆子中提取的有效成分,是近年來臨床治療肝炎效果較好的藥物之一[1],國內(nèi)已廣泛用于乙型肝炎的臨床治療[2]。但是該藥全身分布,消除半衰期短,而且該藥在肝臟中的有效血藥濃度持續(xù)時間短[3��4]。脂質(zhì)體作為一種藥物載體,可以被動靶向到肝脾等網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)豐富的器官,從而較多地分布于肝臟,提高藥物在肝臟中的濃度,且能維持藥物的釋放時間[5]。OMT在水中的溶解度大于1(g·m)/L,是一個親水性很強的弱堿性小分子藥物,其結(jié)構(gòu)式見圖1.

文獻(xiàn)介紹的復(fù)乳法制備的脂質(zhì)體采用的磷脂濃度比較低,且藥脂比亦較低[6],本研究試用較高藥脂比(mol:mol,1:1)和較大原料藥濃度(約16.1 mg/ml,8.05 mg/ml)來制備氧化苦參堿脂質(zhì)體,采用粒度測定儀分析有機(jī)溶劑揮發(fā)后其粒徑大小的分布情況,并采用超聲法對其粒徑進(jìn)行了進(jìn)一步的減小。并且通過微孔濾膜超濾�睭PLC法對其包封率進(jìn)行了測定。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(日本Shimadzu公司);掃描電子顯微鏡(日本Hitachi公司);微粒粒度測定儀(英國Beckman公司);高速均質(zhì)機(jī)(廣州,UITRA TURRAX,T18Basic);DZDW��2型電子恒溫不銹鋼水浴鍋(上海路達(dá)實驗儀器有限公司);Amicon 8010 攪拌超濾器(美國Milipore公司);PHS��2C型精密酸度計(上海雷磁儀器廠);Adventure AR1140電子天平(美國Ohaus 公司);DF��10B集熱式恒溫磁力攪拌器(浙江省樂清縣樂成儀器廠)。

氧化苦參堿(純度>98%,連云港正大天晴有限公司);超濾膜(截流分子量10萬,上海亞東核極樹脂有限公司),氯仿(分析純,天津市博迪化工有限公司);甲醇(色譜純,天津康科德有限公司);Triton��100(北京化工廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 復(fù)乳�踩軇�揮發(fā)法制備氧化苦參堿脂質(zhì)體

根據(jù)文獻(xiàn)報道,復(fù)乳�踩軇�揮發(fā)法是少量的緩沖鹽與多量的有機(jī)溶劑進(jìn)行第一次乳化,形成W/O型反膠團(tuán),減壓除去一部分或完全不除去溶劑,然后加入大量的緩沖液進(jìn)行第二次乳化,形成W/O/W的復(fù)乳系統(tǒng)[6��7],并進(jìn)行除去溶劑最終得到脂質(zhì)體的過程。本實驗欲考察2次乳化除溶劑時,生理鹽水和蒸餾水的使用以及不同水浴溫度對氧化苦參堿脂質(zhì)體包封率的影響。

2.1.1 油相及水相儲備液的制備 稱取83 mg注射用大豆磷脂,膽固醇20.8 mg,配制10 ml氯仿溶液;稱取80.5 mg注射用大豆磷脂,膽固醇20.1 mg,配制10 ml 乙醚溶液;稱取1 600 mg氧化苦參堿,用去離子水定容至10 ml.

2.1.2 脂質(zhì)體的制備與形態(tài)觀察 取溶有注射用大豆磷脂和膽固醇的氯仿儲備溶液,乙醚儲備溶液各1 ml.溶有氧化苦參堿的去離子水溶液各1 ml,其中大豆磷脂︰氧化苦參堿︰膽固醇(w:w:w)=4:1:1,置于10 ml的小試管中,在7 500 r/min均質(zhì)機(jī)下均質(zhì)5 min,得W/O型乳劑,立即將該W/O乳劑傾入水浴溫度為40 ℃,裝有10 ml生理鹽水的圓底燒瓶中,攪拌2 h除去有機(jī)溶劑,得氧化苦參堿脂質(zhì)體。

按同樣方法操作,水化介質(zhì)改為20 ml的生理鹽水、10 ml純凈水、20 ml純凈水制備脂質(zhì)體,每組3份。在45 ℃、55℃下,上述水化介質(zhì)條件下制備脂質(zhì)體,每樣也制備3份。

此外,另取溶有大豆磷脂和膽固醇的氯仿溶液1 ml置茄形瓶中,在50 ℃條件下真空除去有機(jī)溶劑使脂質(zhì)材料在瓶壁內(nèi)形成均勻的薄膜。40 ℃條件下5 ml氧化苦參堿儲備液水化4 h,將所得脂質(zhì)體粗分散液分別通過2次0.8 μm,2次0.45 μm,3次0.22 μm,3次0.1 μm微孔濾膜進(jìn)行整粒。

以45 ℃,10 ml生理鹽水條件下制備所得脂質(zhì)體混懸液為例,觀察脂質(zhì)體的微觀形態(tài)并對其粒度分布進(jìn)行了測定。在4 ℃儲存2周后經(jīng)過掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)有顆粒狀脂質(zhì)體的形成(圖2),圖中板狀晶體可能是高濃度的氧化苦參堿在干燥時析出所致。

采用Beckman粒度測定儀對由復(fù)乳�踩軇�揮發(fā)法制備所得脂質(zhì)體粗混懸液體積徑分布的測定結(jié)果(見圖3A)。未被超聲時,得到的脂質(zhì)體粒度分布非常寬且不均一,甚至有10～30 μm的大粒子出現(xiàn)。而超聲過后的脂質(zhì)體粒度分布變窄且粒徑有較大幅度的減小,較大粒子在體系中所占比重也相應(yīng)減小。同時,以采用薄膜水化分散�参⒖诪V膜擠出法制得的粒徑分布較為均一的脂質(zhì)體(圖3B)作為對照說明醫(yī)學(xué) 全在.線提供www.gydjdsj.org.cn。

2.2 氧化苦參堿脂質(zhì)體包封率的測定方法

2.2.1 氧化苦參堿含量測定HPLC條件 色譜柱:DiamonsilODS 柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),接預(yù)柱,流動相:甲醇︰磷酸鹽緩沖液(含50 mm磷酸,三乙胺調(diào)pH 3.5)(20∶80,v∶v),波長:220 nm,流速:0.8 ml/min,柱溫:室溫,進(jìn)樣量:20 μl.

2.2.2 脂質(zhì)體中總藥量的測定方法 脂質(zhì)體中總藥量的測定方法采用TritonX��100破壞法測定,具體操作參見文獻(xiàn)[8]。

2.2.3 方法回收率考察 采用復(fù)乳�踩軇�揮發(fā)法制備空白脂質(zhì)體,并取空白脂質(zhì)體0.2 ml各3份置10 ml容量瓶中,分別加入9.85 mg/ml的氧化苦參堿藥物溶液0.16、0.20、0.24 ml,得到3種不同濃度藥物的脂質(zhì)體混懸液。向各樣品中滴加10%曲拉通溶液,超聲溶解至出現(xiàn)澄明溶液,加入蒸餾水定容至刻度。同法不加入脂質(zhì)體,制備上述3種濃度的藥物溶液,液相色譜法測定上述樣品溶液的色譜峰峰面積。3次實驗的回收率分別為98.1%、97.5%、99.3%.可見,TritonX��100可以很好地破壞脂質(zhì)體,使藥物完全從脂質(zhì)體中溶解出來,同時TritonX��100與藥物之間無相互作用,對藥物含量測定無影響,可以用于測定脂質(zhì)體中藥物含量�；厥章视嬎愎�式見下:

Recovery rate = AOMT in limsomes/ AOMT in solution × 100%

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