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兩組體外培養(yǎng)BMMNCs起始細(xì)胞數(shù)均為5×106個(gè)，體外擴(kuò)增到P3、P4、P5時(shí)獲得的細(xì)胞數(shù)比較，CMS組均顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果見表1～2。表1CMS和對照組骨髓MSCs生長曲線數(shù)值比較表2CMS和對照組骨髓MSCs體外擴(kuò)增的數(shù)量
2.5 骨髓MSC傳代率比較
15例CMS患者骨髓MSC均可分離培養(yǎng)，其中9例可傳代擴(kuò)增，傳代率為60%，對照組各例均可傳代擴(kuò)增，傳代率為100%，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)。經(jīng)過動態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，CMS組MSCs的生長速度和增殖能力逐漸下降，正常人骨髓MSC可傳代到18代以上，而CMS患者骨髓MSC傳代在12代以下。
3 討論
CMS是長期生活在海拔2 500 m以上高原的世居或移居者，對高原低氧環(huán)境逐漸失去習(xí)服而導(dǎo)致的臨床綜合征，主要表現(xiàn)為紅細(xì)胞增多、血紅蛋白增高(女性≥190g/L，男性≥210g/L)和低氧血癥[2]。CMS最根本的病因是缺氧，MSC對缺血缺氧的環(huán)境敏感，低氧影響著MSC的生理學(xué)特征[3]。關(guān)于CMS患者的MSCs的生物學(xué)特性、功能及其是否參與CMS發(fā)病的研究目前無報(bào)道。在本研究中我們對此做了初步的實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果成功地從CMS患者的骨髓中分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增得到MSCs，將其與正常同齡人骨髓來源的MSCs進(jìn)行了生物學(xué)特征的比較，結(jié)果表明，來自CMS骨髓的MSCs在形態(tài)、表型特點(diǎn)上與正常人MSCs無異，盡管CMS和正常MSCs表面標(biāo)志無明顯不同，細(xì)胞生長的形態(tài)相似，但CMS患者M(jìn)SCs體外傳代生長較正常困難，而能體外傳代生長的CMS骨髓MSCs表現(xiàn)較正常生長旺盛，分化程度較高。上述結(jié)果提示，CMS骨髓MSCs存在特有的生物學(xué)特點(diǎn)。
MSC是造血微環(huán)境的重要組成部分，因其具有自我更新、多向分化等干細(xì)胞特性及支持造血、免疫抑制等功能，近年來成為成體干細(xì)胞領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[4]。MSC作為骨髓基質(zhì)細(xì)胞的前體細(xì)胞，是骨髓內(nèi)造血微環(huán)境的重要組成部分。對處于骨髓中的造血干細(xì)胞(HSC)不僅有空間位置的機(jī)械支持作用，還分泌多種生長因子,如SDF1、MCSF、SCF、FLT3L、TPO、IL7、GMCSF、GCSF、IL6、TGFβ、IFNγ、TNFβ和IL11等支持其造血功能，有助于HSC未分化狀態(tài)的維持。此外，MSCs及其分化細(xì)胞表達(dá)的細(xì)胞外基質(zhì)如粘附因子和整合素家族可直接作用于HSC，促進(jìn)HSC的粘附和歸巢。因此，MSC與HSC自我復(fù)制、增殖、分化及歸巢密切相關(guān)醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站gydjdsj.org.cn。
本研究發(fā)現(xiàn)，在初接種時(shí)骨髓MSC呈圓形,貼壁后呈橢圓形;隨著時(shí)間的推移,貼壁細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞樣，沿胞體長軸排列成單層，并以克隆形式增殖，分裂迅速;消化傳代后細(xì)胞重復(fù)貼壁過程，細(xì)胞形態(tài)和原代無差異。傳代培養(yǎng)時(shí)，骨髓MSC表現(xiàn)出旺盛的增殖能力，這些與相關(guān)報(bào)道一致[5,6]。在培養(yǎng)過程中還發(fā)現(xiàn)，CMS患者骨髓MSCs原代培養(yǎng)所需時(shí)間較長，約20～30 d左右才能達(dá)到傳代的要求，這可能與CMS患者骨髓成熟紅細(xì)胞數(shù)量多致骨髓液粘稠干擾MSCs的貼壁和生長有關(guān)。一旦原代培養(yǎng)成功，傳代后細(xì)胞同樣具有快速增殖能力。CMS患者骨髓MSCs的生長潛伏期為1～3 d，第4天起呈對數(shù)增長，至第7天達(dá)到高峰，平均8～10d可傳一代。
CMS具有很強(qiáng)的體外增殖能力，本研究采用體外培養(yǎng)、傳代的方法，觀察了CMS患者骨髓MSCs不同代數(shù)擴(kuò)增的細(xì)胞數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CMS患者第2代、第3代和第4代MSCs擴(kuò)增數(shù)均明顯高于對照組，表明CMS患者M(jìn)SCs具有更強(qiáng)的增殖能力。
