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引言
c-myc基因是myc癌基因家族中最重要的一員，它與細(xì)胞周期、增殖、分化、凋亡以及腫瘤發(fā)生發(fā)展等密切相關(guān)，目前已經(jīng)成為腫瘤分子機(jī)制研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn).近年來(lái)，許多學(xué)者對(duì)該基因在宮頸癌、肝細(xì)胞癌、胃癌、何杰金氏淋巴瘤等腫瘤中的表達(dá)及作用進(jìn)行研究，但對(duì)該基因在外陰白斑和外陰鱗癌中表達(dá)的研究甚少.我們采用c-myc單克隆抗體(mAb)，對(duì)外陰白斑及外陰鱗癌進(jìn)行了免疫組化檢測(cè)，并探討了該基因蛋白表達(dá)與外陰白斑及外陰鱗癌的關(guān)系醫(yī).學(xué).全.在.線www.med126.com.
1 材料和方法
1.1 材料
西安市3家醫(yī)院1982/2000年病理診斷確診的外陰白斑71例，根據(jù)1976年國(guó)際外陰疾病年會(huì)(ISSVD)制定的標(biāo)準(zhǔn)[1] 命名，其中外陰白斑增生型23例，硬化萎縮型21例，混合型17例，不典型增生型10例.外陰鱗癌21例，根據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理診斷與分級(jí)，其中Ⅰ級(jí)9例，Ⅱ級(jí)7例，Ⅲ級(jí)5例.另設(shè)正常對(duì)照組20例，標(biāo)本取自門診手術(shù)室良性病變手術(shù)切緣胸腹部正常皮膚.
1.2 方法
標(biāo)本經(jīng)100mL?L-1 中性甲醛溶液固定24h，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片5μm厚，玻片用APES膠處理.免疫組化試劑c-myc mAb(9E10)，HIGH-SABC試劑盒(SA1080)，DAB(ED1022)均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司.操作步驟:常規(guī)脫蠟至水;蒸餾水新鮮配制3mL?L-1 H2 O2 ，室溫10min以滅活內(nèi)源性酶;微波抗原修復(fù)20min;滴加抗原修復(fù)液I，室溫20min后;滴加正常山羊血清封閉液，室溫20min;滴加一抗單克隆抗體c-myc工作液，置濕盒中4℃過(guò)夜;滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，37℃20min;滴加試劑HIGH-SABC，37℃20min;DAB室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間，及時(shí)終止;蘇木精復(fù)染，乙醇脫水，二甲苯透明，樹(shù)膠封片.鏡下觀察:免疫組化陽(yáng)性信號(hào)為棕黃色顆粒，陰性為無(wú)顆�；蚩梢烧�.每次試驗(yàn)均設(shè)對(duì)照實(shí)驗(yàn):陽(yáng)性對(duì)照:用已知c-myc陽(yáng)性的切片重復(fù)染色;空白對(duì)照:用PBS代替第一抗體;替代對(duì)照:用正常鼠血清代替的抗體.統(tǒng)計(jì)方法為χ2 連續(xù)校正檢驗(yàn).
2 結(jié)果
2.1 c┐myc基因蛋白細(xì)胞定位和分布特點(diǎn)
c-myc基因蛋白在正常組織中呈表皮彌漫性或散在分布，以細(xì)胞核陽(yáng)性為主，細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性散在分布(Fig1);外陰白斑增生型呈表皮全層分布，以細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性為主，細(xì)胞核陽(yáng)性散在分布，為粗細(xì)不一的棕黃色顆粒而且染色較深(Fig2，3);外陰白斑硬化萎縮型和混合型主要分布在基底層，棘層也有散在分布，以細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性為主(Fig4);不典型增生組織和鱗癌組織中主要分布在間變和癌變的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，呈局灶性或彌漫性分布(Fig5，6).
2.2 c┐myc基因蛋白表達(dá)
正常組織、外陰白斑及外陰鱗癌中均有c-myc蛋白陽(yáng)性表達(dá)，而陽(yáng)性率各不相同(Tab1).各組與鱗癌組相比較，正常組(χ2 =11.027)、增生組(χ2 =5.692)、硬化萎縮組(χ2 =16.488)和混合組(χ2 =6.497)均有顯著差別(P<0.05)，不典型增生組(χ2 =1.072)無(wú)顯著差別(P>0.05);各組與硬化萎縮組相比，正常組(χ2 =0.847)和混合組(χ2 =3.412)無(wú)顯著差別(P>0.05)，增生組(χ2 =5.361)和不典型增生組(χ2 =7.682)有顯著差別(P<0.05).不同組織分級(jí)的外陰鱗癌中c-myc 基因蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率也不相同(Tab2).
表1 外陰白斑和外陰鱗癌中c-myc基因蛋白的表達(dá)(略)
Tab1 c-myc gene protein expression in genitalia leukoplakia and squamous cell carcinoma of vulva
表2 不同組織分級(jí)的外陰鱗癌中c-myc基因蛋白的表達(dá)(略)
Tab2 c-myc gene protein expression in squamous cell carci-noma of vulva of different histology grades
3 討論
