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全科醫(yī)學(xué)論文微血栓致缺血性心肌病發(fā)病機(jī)制的研究
1 材料和方法：
1.1 動物
雄性 SD 大鼠90 只體重 (250±30) g，購于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二臨床醫(yī)學(xué)院動物中心。實(shí)驗(yàn)動物及實(shí)驗(yàn)步均按照合國家實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l列執(zhí)行。
1.2 試劑與器材
月桂酸鈉 (Sigma，L9755 )，大鼠可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白（soluble thrombomdulin，sTM)ELISA 試劑盒(美國R&D)，中性甲醛固定液(南京化學(xué)試劑公司生產(chǎn))，戊二醛（湖北新景新材料有限公司) Motec Digital Microscope 成像分析系統(tǒng) (德國 Motec )，透射電子顯微鏡(日本JEOL )，超聲儀 (GE Vivid7 )，L550 離心機(jī)(長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)。醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站www.gydjdsj.org.cn
1.3 實(shí)驗(yàn)分組
90 只大鼠隨機(jī)分成3 組：模型組30 只，假手術(shù)組30 只和正常對照組30 只，各組中隨機(jī)選擇12 只進(jìn)行超聲檢測，另于術(shù)后1、7、28 天每組各選6 只進(jìn)行組織學(xué)檢查。
1.4 實(shí)驗(yàn)方法
SD 大鼠，10%水合氯醛（0.35ml/100g)腹腔內(nèi)注射麻醉，常規(guī)備皮，氣管插管連接呼吸機(jī)，右側(cè)臥位固定，于左前外側(cè)第三肋間開胸，逐層剝離進(jìn)入胸腔，分離主動脈并用血管夾夾閉主動脈后，迅速以微量注射器從主動脈根部注射月桂酸鈉(1μg/g)，夾閉20s，松開血管夾，待呼吸心跳穩(wěn)定后逐層關(guān)胸，拔除氣管插管，術(shù)畢腹腔注射80 萬單位青霉素并于術(shù)后連續(xù)抗炎3 日，普通飼養(yǎng)。假手術(shù)組給予同等劑量的生理鹽水替代月桂酸鈉進(jìn)行冠脈內(nèi)注射，正常對照組不進(jìn)行任何處理，余均同模型組。各組于術(shù)后1、7、28 天，分別取6 只鼠處死，取材進(jìn)行指標(biāo)檢測。
1.5 檢測指標(biāo)
1.5.1 病理組織學(xué)檢測：
按照時間點(diǎn)取鼠處死，開胸，取出心臟，修剪去除心耳及主要大血管，中性甲醛固定，石蠟包埋。取左室乳頭肌段心肌，連續(xù)切片，將組織切成4μm 厚的切片。每只鼠隨機(jī)取兩張切片進(jìn)行HE 以染色觀察微血栓的形成。微血栓指在小于150μm 的微血管中，由血小板、纖維素或/和紅細(xì)胞組成，HE 染色呈粉紅色，單純的紅細(xì)胞堆積認(rèn)為是血管中殘留的血液，HE 染色呈點(diǎn)樣深紅色[7]。同時取兩張切片進(jìn)行馬休黃－酸性品紅－苯胺藍(lán)（改良Lendrum法)染色，觀察冠脈微血管原位栓塞組成成分，纖維素呈鮮紅色，肌纖維呈紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)褐色，膠原纖維呈藍(lán)色，紅細(xì)胞呈黃色，陳舊的纖維素成紫藍(lán)色。
