第二部分 病毒學(xué)
病毒(virus)是所有微生物中體積最小的一種，絕大部分病毒在普通光學(xué)顯微鏡下不能看到，必需用電子顯微鏡才可查見。由于病毒具有嚴(yán)格的寄生性，必須在易感的活組織(細(xì)胞)中才能增殖，故通常將其接種于動(dòng)物(小鼠、家兔及猴等)、雞胚胎或組織(細(xì)胞)中使之增殖，進(jìn)行病毒的分離。有些病毒在寄生的細(xì)胞內(nèi)可形成斑塊，稱為包涵體，可用普通顯微鏡檢查。
病毒性疾病常用的血清學(xué)檢查法有血凝抑制、補(bǔ)體結(jié)合及中和試驗(yàn)等。近年來gydjdsj.org.cn/rencai/，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，在原有血清學(xué)檢查技術(shù)的基礎(chǔ)上，又建立了特異性及敏感性均較高的新的血清學(xué)檢測(cè)法，如熒光抗體檢測(cè)技術(shù)、酶免疫檢測(cè)技術(shù)及固相放射免疫技術(shù)等，在實(shí)際工作中可隨檢查目的的不同而選不同的方法。
實(shí)驗(yàn)十六 病毒感染形態(tài)學(xué)觀察
病毒體積微小，不僅肉眼看不見，即使是最好的光學(xué)顯微鏡也只能看到個(gè)別的大病毒。本世紀(jì)30年代初發(fā)明了電鏡，擴(kuò)大了人們的視野。在電鏡下，不僅能觀察各種病毒的外形，且可看清其結(jié)構(gòu)。為了觀察病毒與細(xì)胞的關(guān)系，一般將接種病毒的組織培養(yǎng)固定，包埋后進(jìn)行超薄切片，染色后觀察。觀察病毒形態(tài)與結(jié)構(gòu)，可用磷鎢酸負(fù)染法。
一、磷鎢酸負(fù)染法
磷鎢酸負(fù)染法是利用重金屬鹽類溶液處理生物標(biāo)本，使它在電鏡下呈現(xiàn)出良好的反差。經(jīng)此種染色處理的生物標(biāo)本，在電鏡下與正染色相反，不是亮環(huán)境下的黑色物象而是暗背景(重金屬染液)下的亮象(物體)。
【材料】
1．病毒懸液。
2．染液：磷鎢酸鹽(鈉、鉀)。
3．銅網(wǎng)。
【方法】
1．用吸管吸取少量病毒懸液，直接滴在銅網(wǎng)上，一般每份標(biāo)本用3～4個(gè)銅網(wǎng)。待3～5min后吸去懸液或用小片濾紙吸干，然后用另一吸管吸染液滴于銅網(wǎng)上，待2～3min吸去多余染液，自然干燥后即可進(jìn)行電鏡觀察。
2．電鏡觀察
(1) 形態(tài)：電鏡下病毒有球形、桿形和蝌蚪形等。粘病毒呈桿狀或多形態(tài)，腺病毒和小RNA病毒屬球形，噬菌體呈蝌蚪形。應(yīng)用電鏡技術(shù)也可較為準(zhǔn)確地測(cè)定病毒體的大小。一般無包膜病毒大小比較一致，有包膜病毒則變動(dòng)較大，對(duì)這類病毒的大小測(cè)定，應(yīng)求其平均值。病毒大小使用的單位為納米(nm=nanometer)。
(2) 結(jié)構(gòu)：一般而言，大部分球形病毒屬立體對(duì)稱，大部分桿形病毒屬螺旋對(duì)稱。如腺病毒和小RNA病毒呈20面對(duì)稱；流感病毒則以螺旋對(duì)稱排列。電鏡還可觀察病毒有無包膜及亞單位結(jié)構(gòu)。
二、病毒包涵體的觀察
在某些病毒感染的細(xì)胞內(nèi)，經(jīng)染色后，�？稍谄浼�(xì)胞漿或核內(nèi)的局部見到一些嗜酸性或嗜堿性的染色改變，稱為包涵體。病毒感染形成的包涵體，因在組織細(xì)胞內(nèi)定位不同及其本身的嗜染色性不同而具有診斷價(jià)值(如狂犬病病毒包涵體位于腦神經(jīng)細(xì)胞漿藥品數(shù)據(jù)內(nèi)，腺病毒包涵體位于感染的細(xì)胞核內(nèi)，而巨細(xì)胞病毒包涵體則可在胞漿和核內(nèi)出現(xiàn))。
【材料】
1．巨細(xì)胞病毒。
2．傳代人胚肺纖維母細(xì)胞培養(yǎng)小瓶。
3．蘇木精一伊紅染色液。
4．Borin固定液。
【方法】
1．將巨細(xì)胞病毒接種于有蓋玻片的傳代人胚肺纖維母細(xì)胞培養(yǎng)小瓶中，37℃孵育，待其出現(xiàn)80%～100%細(xì)胞病變后，取出蓋玻片，在生理鹽水中漂洗2次。
2．用Borin固定液將上述漂洗后的蓋玻片固定20～30min，再用生理鹽水沖洗2次。
3．蘇木精一伊紅染色。
4．用光學(xué)顯微鏡(低倍鏡或高倍鏡檢查：在巨細(xì)胞病毒感染的人胚肺纖維母細(xì)胞核內(nèi)有嗜酸性包涵體(有時(shí)亦可嗜堿性)，包涵體周圍有與核膜明顯區(qū)分的一輪暈。一個(gè)核內(nèi)大多有1個(gè)包涵體，但亦有2～3個(gè)的。胞漿內(nèi)可有境界不明的較小嗜堿性包涵體，但診斷意義不大。
