第二部分 病毒學
病毒(virus)是所有微生物中體積最小的一種，絕大部分病毒在普通光學顯微鏡下不能看到，必需用電子顯微鏡才可查見。由于病毒具有嚴格的寄生性，必須在易感的活組織(細胞)中才能增殖，故通常將其接種于動物(小鼠、家兔及猴等)、雞胚胎或組織(細胞)中使之增殖，進行病毒的分離。有些病毒在寄生的細胞內(nèi)可形成斑塊，稱為包涵體，可用普通顯微鏡檢查。
病毒性疾病常用的血清學檢查法有血凝抑制、補體結(jié)合及中和試驗等。近年來gydjdsj.org.cn/rencai/，隨著科學技術的發(fā)展，在原有血清學檢查技術的基礎上，又建立了特異性及敏感性均較高的新的血清學檢測法，如熒光抗體檢測技術、酶免疫檢測技術及固相放射免疫技術等，在實際工作中可隨檢查目的的不同而選不同的方法。
實驗十六 病毒感染形態(tài)學觀察
病毒體積微小，不僅肉眼看不見，即使是最好的光學顯微鏡也只能看到個別的大病毒。本世紀30年代初發(fā)明了電鏡，擴大了人們的視野。在電鏡下，不僅能觀察各種病毒的外形，且可看清其結(jié)構。為了觀察病毒與細胞的關系，一般將接種病毒的組織培養(yǎng)固定，包埋后進行超薄切片，染色后觀察。觀察病毒形態(tài)與結(jié)構，可用磷鎢酸負染法。
一、磷鎢酸負染法
磷鎢酸負染法是利用重金屬鹽類溶液處理生物標本，使它在電鏡下呈現(xiàn)出良好的反差。經(jīng)此種染色處理的生物標本，在電鏡下與正染色相反，不是亮環(huán)境下的黑色物象而是暗背景(重金屬染液)下的亮象(物體)。
【材料】
1．病毒懸液。
2．染液：磷鎢酸鹽(鈉、鉀)。
3．銅網(wǎng)。
【方法】
1．用吸管吸取少量病毒懸液，直接滴在銅網(wǎng)上，一般每份標本用3～4個銅網(wǎng)。待3～5min后吸去懸液或用小片濾紙吸干，然后用另一吸管吸染液滴于銅網(wǎng)上，待2～3min吸去多余染液，自然干燥后即可進行電鏡觀察。
2．電鏡觀察
(1) 形態(tài)：電鏡下病毒有球形、桿形和蝌蚪形等。粘病毒呈桿狀或多形態(tài)，腺病毒和小RNA病毒屬球形，噬菌體呈蝌蚪形。應用電鏡技術也可較為準確地測定病毒體的大小。一般無包膜病毒大小比較一致，有包膜病毒則變動較大，對這類病毒的大小測定，應求其平均值。病毒大小使用的單位為納米(nm=nanometer)。
(2) 結(jié)構：一般而言，大部分球形病毒屬立體對稱，大部分桿形病毒屬螺旋對稱。如腺病毒和小RNA病毒呈20面對稱；流感病毒則以螺旋對稱排列。電鏡還可觀察病毒有無包膜及亞單位結(jié)構。
二、病毒包涵體的觀察
在某些病毒感染的細胞內(nèi)，經(jīng)染色后，常可在其細胞漿或核內(nèi)的局部見到一些嗜酸性或嗜堿性的染色改變，稱為包涵體。病毒感染形成的包涵體，因在組織細胞內(nèi)定位不同及其本身的嗜染色性不同而具有診斷價值(如狂犬病病毒包涵體位于腦神經(jīng)細胞漿藥品數(shù)據(jù)內(nèi)，腺病毒包涵體位于感染的細胞核內(nèi)，而巨細胞病毒包涵體則可在胞漿和核內(nèi)出現(xiàn))。
【材料】
1．巨細胞病毒。
2．傳代人胚肺纖維母細胞培養(yǎng)小瓶。
3．蘇木精一伊紅染色液。
4．Borin固定液。
【方法】
1．將巨細胞病毒接種于有蓋玻片的傳代人胚肺纖維母細胞培養(yǎng)小瓶中，37℃孵育，待其出現(xiàn)80%～100%細胞病變后，取出蓋玻片，在生理鹽水中漂洗2次。
2．用Borin固定液將上述漂洗后的蓋玻片固定20～30min，再用生理鹽水沖洗2次。
3．蘇木精一伊紅染色。
4．用光學顯微鏡(低倍鏡或高倍鏡檢查：在巨細胞病毒感染的人胚肺纖維母細胞核內(nèi)有嗜酸性包涵體(有時亦可嗜堿性)，包涵體周圍有與核膜明顯區(qū)分的一輪暈。一個核內(nèi)大多有1個包涵體，但亦有2～3個的。胞漿內(nèi)可有境界不明的較小嗜堿性包涵體，但診斷意義不大。
