藥物分析的基礎(chǔ)知識(shí)
第一節(jié) 藥品檢驗(yàn)的基本知識(shí)
一、藥品檢驗(yàn)工作的程序
1.取樣：應(yīng)考慮取樣的科學(xué)性、真實(shí)性和代表性。
樣品總件數(shù)為X，
n≤3，應(yīng)每件取樣
n≤300，取樣件數(shù)為 +1
n＞300，取樣件數(shù)為 /2+1
2.檢驗(yàn)：鑒別、檢查、含量測定。
3.記錄和報(bào)告：檢驗(yàn)記錄應(yīng)有供試品信息、檢驗(yàn)依據(jù)；取樣、報(bào)告日期；檢驗(yàn)項(xiàng)目、數(shù)據(jù)、結(jié)果；結(jié)論判定；檢驗(yàn)者簽字或蓋章。
檢驗(yàn)報(bào)告書內(nèi)容有供試品信息，檢驗(yàn)依據(jù)、取樣、報(bào)告日期，檢驗(yàn)結(jié)果、結(jié)論，檢驗(yàn)者、復(fù)核者及有關(guān)負(fù)責(zé)人簽名或蓋章。醫(yī) 學(xué)全,在線.搜集.整理gydjdsj.org.cn
二、計(jì)量儀器認(rèn)證的要求
國家對(duì)社會(huì)公用計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)器具、企業(yè)、部門用最高計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)器具，以及列入強(qiáng)制檢定目錄的工作計(jì)量器具實(shí)行強(qiáng)制檢定。其他計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)器具，使用單位應(yīng)當(dāng)自行定期檢定或送計(jì)量檢定機(jī)構(gòu)檢定，縣級(jí)以上政府計(jì)量行政部門監(jiān)督檢查。
三、常用分析儀器的使用和校正
1．分析天平
稱量的相對(duì)誤差應(yīng)小于千分之一，根據(jù)取樣量選用感量0.1、0.01、0.001mg三種。
方法有減量法、增量法兩種。
2．玻璃儀器
容量瓶：允差為容積的千分之一
移液管：100ml(±0.10ml)；50ml(±0.08ml)；25ml(±0.05ml)
滴定管：50ml(±0.05ml)；25ml(±0.03ml)；10ml(±0.02ml)
5ml(±0.01ml)
第二節(jié) 藥物分析數(shù)據(jù)的處理
一、誤差
1.真值 指某物理量客觀存在的確定值，它通常是未知的。由于誤差的客觀存在，真值一般是無法測得的。
測量次數(shù)無限多時(shí)，根據(jù)正負(fù)誤差出現(xiàn)的概率相等的誤差分布定律，在不存在系統(tǒng)誤差的情況下，它們的平均值極為接近真值。故在實(shí)驗(yàn)科學(xué)中真值的定義為無限多次觀測值的平均值。
2.誤差 測量值和真實(shí)值的偏離。誤差越小，準(zhǔn)確性越高
(1)絕對(duì)誤差：測量值和真實(shí)值之差�？梢允钦�，也可以是負(fù)值，其單位與測量值單位相同。
以χ代表測量值，μ代表真實(shí)值，絕對(duì)誤差δ為：
δ＝χ－μ
(2)相對(duì)誤差：誤差在測量值中所占比例，相對(duì)誤差沒有單位，便于比較。
相對(duì)誤差＝絕對(duì)誤差/真實(shí)值×100%
3. 誤差的分類
根據(jù)誤差的性質(zhì)和產(chǎn)生的原因，可將誤差分為系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差二類。
二、有效數(shù)字
1.有效數(shù)字：實(shí)驗(yàn)測量中所使用的儀器儀表只能達(dá)到一定的精度，因此測量或運(yùn)算的結(jié)果不可能也不應(yīng)該超越儀器儀表所允許的精度范圍。gydjdsj.org.cn分析工作中實(shí)際能測量到的數(shù)字稱為有效數(shù)字，只能具有一位存疑值。
有效數(shù)字的表示：應(yīng)注意非零數(shù)字前面和后面的零。0.009140km前面的三個(gè)零不是有效數(shù)字，它與所用的單位有關(guān)。非零數(shù)字后面的零是否為有效數(shù)字，取決于最后的零是否用于定位。
2.有效數(shù)字的修約
(1) 四舍六入五成雙
(2) 只允許對(duì)原測量值一次修約至所需位數(shù)
(3) 運(yùn)算過程中可多保留一位有效數(shù)字，計(jì)算出結(jié)果后再修約至應(yīng)有有效數(shù)字位數(shù)。
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誤差分類 |
誤差性質(zhì) |
產(chǎn)生原因 |
減小或消除方法 | |
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系統(tǒng)誤差 |
儀器誤差 |
分析過程中由于某些恒定的或按一定規(guī)律起作用的因素所形成的誤差。相同條件下作平行測定。 |
由于儀器或工具本身不精密而造成，即指示的數(shù)值不準(zhǔn)確。 |
校正儀器，采用校正值。 |
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試劑誤差 |
測定時(shí)必然會(huì)重復(fù)出現(xiàn)，使測定結(jié)果系統(tǒng)偏高或偏低�？赏ㄟ^實(shí)驗(yàn)設(shè)法減小。決定測試的準(zhǔn)確度。 |
試劑純度不夠或標(biāo)定欠準(zhǔn)確。 |
進(jìn)行空白試驗(yàn)，采用高純度試劑，準(zhǔn)確予以標(biāo)定。 | |
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方法誤差 |
測定的方法本身不完善，如反應(yīng)不完全或有副反應(yīng)，計(jì)算公式不完全符合真實(shí)情況等 |
采用標(biāo)準(zhǔn)方法與所用方法進(jìn)行對(duì)照。 | ||
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操作誤差 |
由于操作人員的主觀偏見或視覺辨別能力差，以及操作不當(dāng)而造成的，如滴定時(shí)讀數(shù)方法，滴定終點(diǎn)的判斷等。 gydjdsj.org.cn |
嚴(yán)格訓(xùn)練，提高操作人員的技術(shù)水平。 | ||
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隨機(jī)誤差 |
在測試過程中一系列的有關(guān)因素微小的隨機(jī)波動(dòng)而形成的，不可避免且無法校準(zhǔn)的。決定分析結(jié)果的精密度 |
由偶然的、難以預(yù)料的和無法控制的因素而造成，如環(huán)境溫度波動(dòng)、空氣濕度、氣壓的變化等 |
對(duì)同一試樣進(jìn)行多次重復(fù)測量，如已對(duì)系統(tǒng)誤差進(jìn)行校準(zhǔn)，則多次測量的平均值將接近真實(shí)值。 | |
3.運(yùn)算法則
(1)加、減法運(yùn)算
有效數(shù)字進(jìn)行加、減法運(yùn)算時(shí)，按照小數(shù)點(diǎn)后位數(shù)最少的保留其他個(gè)數(shù)位數(shù)。
(2)乘、除法運(yùn)算
兩個(gè)量相乘(相除)的積(商)，其有效數(shù)字位數(shù)與各數(shù)中有效數(shù)字位數(shù)最少的相同。
第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法的驗(yàn)證
一般常用的分析效能評(píng)價(jià)指標(biāo)包括：準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、檢測限、定量限、線性與范圍、耐用性等；測定法的效能指標(biāo)可評(píng)價(jià)分析測定方法，也可作為建立新的測定方法的實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。
1.準(zhǔn)確度 是指測得結(jié)果與真實(shí)值接近的程度，表示分析方法測量的正確性。
由于“真實(shí)值”無法準(zhǔn)確知道，因此，通常采用回收率試驗(yàn)來表示。
制劑的含量測定時(shí)，采用在空白輔料中加入原料藥對(duì)照品的方法作回收試驗(yàn)及計(jì)算RSD。
回收率＝測定值/加入量×100％
2.精密度 系指用該法測定同一勻質(zhì)樣品的一組測量值彼此符合的程度。它們?cè)浇咏驮骄堋Ｔ谒幬锓治鲋�，常用�?biāo)準(zhǔn)偏差(SD或S)； gydjdsj.org.cn相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，也稱變異系數(shù)(CV)表示。
3.專屬性 是指在樣品介質(zhì)中有其他組分共存時(shí)該分析方法對(duì)供試物質(zhì)準(zhǔn)確而專屬的測定能力。
4.檢測限 是指分析方法能夠從背景信號(hào)中區(qū)分出藥物時(shí)，所需樣品中藥物的最低濃度，無需定量測定。
當(dāng)用儀器分析方法時(shí)，可用已知濃度的樣品與空白試驗(yàn)對(duì)照，記錄測得的被測藥物信號(hào)強(qiáng)度S與噪音(或背景信號(hào))強(qiáng)度N，以能達(dá)到S／N＝2或S／N＝3時(shí)的樣品最低藥濃為檢測限。
5.定量限 是指在保證具有一定可靠性(一定準(zhǔn)確度和精密度)的前提下，分析方法能夠測定出的樣品中藥物的最低濃度。
它反映了分析方法測定低藥物濃度樣品時(shí)具有的可靠性。用儀器分析方法時(shí)，則往往將多次空白試驗(yàn)測得的背景響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)差(即空白標(biāo)準(zhǔn)差)乘以10，作為定量限的估計(jì)值。
6.線性 在給定范圍內(nèi)測試結(jié)果與樣品中供試物濃度成正比的程度。即是供試物濃度的變化與試驗(yàn)結(jié)果(或測得的響應(yīng)信號(hào))成線性關(guān)系。
7.范圍 是指利用一種方法取得精密度、準(zhǔn)確度均符合要求的試驗(yàn)結(jié)果，而且成線性的供試物濃度的變化范圍，對(duì)于含量測定要求一般濃度上限為樣品最高濃度的120％，下限為樣品最低濃度的80％ (但應(yīng)高于LOQ)。
8.耐用性 是指利用相同的方法在各種正常實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)同一樣品進(jìn)行分析所得結(jié)果的重現(xiàn)程度。包括不同的實(shí)驗(yàn)室、不同的分析人員、不同的儀器、不同批號(hào)的試劑、不同的測試耗用時(shí)間、不同的分析溫度、不同的測定日期等等。
評(píng)價(jià)一種分析方法的效能，一般根據(jù)方法的使用對(duì)象區(qū)別。有以下四種情況：
A．用于原料藥中主要組分或制劑中有效組分含量測定的方法：除了檢測限和定量限二項(xiàng)指標(biāo)外，對(duì)精密度、準(zhǔn)確度、選擇性、線性與范圍、耐用性等均應(yīng)有所要求；醫(yī)學(xué)全在線,搜集整,理gydjdsj.org.cn
B．用于原料藥中雜質(zhì)測定或制劑中降解產(chǎn)物測定：
①用于含量測定，除檢測限不必要求外，對(duì)準(zhǔn)確度、精密度、線性與范圍、定量限、耐用性等均應(yīng)有所要求；
②用于限度檢查，只對(duì)檢測限、專屬性和耐用性三項(xiàng)指標(biāo)有所要求，其余均無需要求。
