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本法系比較肝素標(biāo)準(zhǔn)品(S)與供試品(T)延長新鮮兔血或豬、兔血漿凝結(jié)時(shí)間的程度,以測定供試品的效價(jià)。
肝素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制
精密稱取肝素標(biāo)準(zhǔn)品適量，按標(biāo)示效價(jià)加0.9％氯化鈉溶 液溶解使成幾種不同濃度的溶液，相鄰兩種濃度每1ml中所含肝素單位數(shù)相差應(yīng)相等,且不超過5個(gè)單位，一般可配成每1ml中含85、90、95、100、105、110、115、120、125等單位的溶液。
供試品溶液的配制
供試品如為粉末，精密稱取適量,按干燥品計(jì)算，加0.9％氯化鈉溶液溶解使成每1ml中含1mg的溶液。供試品如為注射液,則按標(biāo)示量加0.9％氯化鈉溶液稀釋至同樣濃度。
血漿的制備
按肝素生物檢定法中血漿制備法制備(附錄Ⅻ D)。
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取管徑均勻(0.8×3.8cm)清潔干燥的小試管8支,第1管和第8管為空白對(duì)照管，加入0.9％氯化鈉溶液0.2ml，第2～7管為供試品管，每管均加入供試品溶液0.1ml,再每管分別加入上述一種濃度的肝素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0.1ml,立即混勻。取剛抽出的兔血適量，分別加入上述8支試管內(nèi),每管 0.8ml，立即混勻，避免產(chǎn)生氣泡,并開始計(jì)算時(shí)間，將小試管置37±0.5℃恒溫水浴中,從采動(dòng)物血時(shí)起至小試管放入恒溫水浴的時(shí)間不得超過2分鐘；如用血漿,則分別于上述各管中加入0.7ml的血漿，置37±0.5℃恒溫水浴中預(yù)熱5～10分鐘，每管分別加入1％氯化鈣溶液0.1ml，立即混勻，避免產(chǎn)生氣泡,并開始計(jì)算時(shí)間。觀察并記錄各管凝結(jié)時(shí)間。
結(jié)果判斷
兩支對(duì)照管的凝結(jié)時(shí)間相差不得超過1.35倍。在供試品管的凝結(jié)時(shí)間不超過兩支對(duì)照管平均凝結(jié)時(shí)間150％的各管中，以肝素濃度最高的一管作為終點(diǎn)管。
同樣重復(fù)5次，5次試驗(yàn)測得終點(diǎn)管的肝素濃度,相差不得大于10個(gè)單位。5次結(jié)果的平均值，即為硫酸魚精蛋白供試品(干燥品)1mg中和肝素的單位數(shù)。
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