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抗生素類藥物
β-內(nèi)酰胺類抗生素
本類抗生素包括青霉素族和頭孢菌素族，他們的分子結(jié)構(gòu)中均含有β-內(nèi)酰胺環(huán)。
基本結(jié)構(gòu)：
分子中都有一個(gè)游離羧基和酰胺側(cè)鏈。
青霉素：β-內(nèi)酰胺環(huán)和氫化噻唑環(huán)
頭孢菌素：β-內(nèi)酰胺環(huán)和氫化噻嗪環(huán)
性質(zhì)：
溶解度：青霉素和頭孢菌素分子中的游離羧基具有相當(dāng)強(qiáng)的酸性，能與無機(jī)堿或某些有機(jī)堿形成鹽。其堿金屬鹽易溶于水，而有機(jī)堿鹽難溶于水，易溶于甲醇等有機(jī)溶劑。
旋光性：青霉素族分子中含有三個(gè)手性碳原子，頭孢菌素族含有兩個(gè)手性碳原子，都具有旋光性。
紫外吸收特性
青霉素分子中的母核部分無紫外吸收，但出側(cè)鏈酰胺基上R如具苯環(huán)共軛系統(tǒng)，則有紫外吸收特性。
頭孢菌素由于母核部分具有O-C=N-C=C結(jié)構(gòu)，故有紫外吸收。
β-內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性
β-內(nèi)酰胺環(huán)是青霉素族結(jié)構(gòu)最不穩(wěn)定的地方，如與酸、堿、青霉素酶、羥胺及某些金屬離子（銅、鉛、汞和銀）等作用時(shí)，易發(fā)生水解和分子重排，導(dǎo)致β-內(nèi)酰胺環(huán)的破壞而失去活性。
鑒別試驗(yàn)：
⑴鉀、鈉鹽的火焰反應(yīng)
⑵呈色反應(yīng)
①羥肟酸鐵反應(yīng)：青霉素及頭孢菌素在堿性中與羥胺作用，β-內(nèi)酰胺環(huán)破裂生成羥肟酸，在稀酸中與高鐵離子呈色。
頭孢哌酮：紅棕色；氨芐西林：紫紅色；頭孢氨芐：紅褐～褐色；頭孢噻吩鈉：紅褐色；普魯卡因青霉素：紫紅色；頭孢唑啉鈉：紅棕色。
②硫酸—硝酸呈色反應(yīng)：頭孢菌素能與硫酸—硝酸反應(yīng)后成色。
頭孢噻吩鈉：紅棕色；頭孢氨芐：黃色；頭孢噻肟鈉：亮黃色。
③茚三酮反應(yīng)：某些具有α-氨基的本類藥物（如氨芐西林）遇茚三酮即顯藍(lán)紫色。
④與斐林試劑反應(yīng)：本類藥物具有類似肽鍵結(jié)構(gòu)，可產(chǎn)生雙縮脲反應(yīng)。開環(huán)分解，使堿性酒石酸銅鹽還原顯紫色。阿莫西林、氨芐西林鈉可采用本法鑒別。
⑤變色酸—硫酸呈色反應(yīng)：阿莫西林加變色酸-硫酸實(shí)際混合后，于150℃加熱2～3min，因分解除甲醛與變色酸縮合而呈深褐色。
⑥與重氮苯磺酸呈色反應(yīng)：頭孢菌素族7位側(cè)鏈含有酚羥基基團(tuán)時(shí)，能與重氮苯磺酸試液產(chǎn)生偶合反應(yīng)，顯橙黃色。
⑦與銅鹽呈色：頭孢氨芐加醋酸、硫酸銅、氫氧化鈉試液后，生成銅配位鹽，顯橄欖綠色。
⑶沉淀反應(yīng)
①在稀酸中生成白色沉淀：青霉素鉀和青霉素鈉加水溶解后，加稀鹽酸2滴，即析出難溶于水的游離基白色沉淀。此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或過量的鹽酸中成鹽。
②有機(jī)胺鹽的特殊反應(yīng)
重氮化-偶合反應(yīng)：普魯卡因青霉素水溶液酸化后，顯普魯卡因芳伯氨基的重氮化-偶合反應(yīng)，生成偶氮染料紅色沉淀。
與三硝基苯酚的反應(yīng)：芐星青霉素經(jīng)氫氧化鈉堿化后，用乙醚提取，蒸去乙醚后的殘?jiān)卸S基乙二胺，加稀乙醇使殘?jiān)芙�，加三硝基苯酚的飽和溶液，加熱后放冷，即析出二芐基乙二胺苦味酸結(jié)晶。
⑷光譜法
①紫外分光光度法
最大吸收波長(zhǎng)鑒定法
水解產(chǎn)物的最大吸收波長(zhǎng)鑒定法
②紅外吸收光譜
③核磁共振光譜
⑸色譜法
①薄層色譜法
②高效液相色譜法
含量測(cè)定
⑴碘量法（芐星青霉素）
青霉素或頭孢菌素分子不消耗碘，其降解產(chǎn)物消耗碘。
反應(yīng)分兩步進(jìn)行：第一步反應(yīng)是按化學(xué)計(jì)算量進(jìn)行；第二步青霉噻唑烷酸在酸性條件下被碘氧化的反應(yīng)受溫度、pH、時(shí)間等諸多因素影響，故耗碘量沒有固定的量關(guān)系。因此試驗(yàn)過程中要嚴(yán)格控制溫度，同時(shí)采用與青霉素標(biāo)準(zhǔn)品平行對(duì)照測(cè)定，則可抵消上述可變因素的影響。
碘與青霉噻唑酸的作用以Ph4.5，溫度在24～26℃為最好。1摩爾青霉素能吸收8摩爾的碘,故本法的靈敏度較高。
注意：在滴定終點(diǎn)時(shí)放慢滴定速度，并強(qiáng)力振搖；如果滴定至終點(diǎn)又返現(xiàn)藍(lán)色，說明真正的終點(diǎn)尚未到達(dá)。
⑵汞量法（青霉素鈉、青霉素鉀）
青霉素分子不與汞鹽反應(yīng)，而其堿性水解產(chǎn)物青霉噻唑酸及繼續(xù)水解生成的青霉胺都能與汞鹽定量反應(yīng)，根據(jù)消耗的汞鹽量可以計(jì)算青霉素的含量。
電位滴定法：指示電極：鉑電極；參比電極：汞-硫酸亞汞電極。滴定液：硝酸汞。
每1ml的硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相當(dāng)于7.128mg的總青霉素。
總青霉素的百分含量與降解產(chǎn)物的百分含量之差值即為青霉素的含量。
注意：青霉素含量計(jì)算以第二次滴定終點(diǎn)為依據(jù)；水解必須完全；空白試驗(yàn)也要稱取供試品，但不經(jīng)氫氧化鈉水解；與碘量法比較，汞量法測(cè)定青霉素的主要優(yōu)點(diǎn)是不需要青霉素標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照，汞鹽滴定液用EDTA標(biāo)定即可。
⑶酸堿滴定法（苯唑西林鈉）
⑷紫外-可見分光光度法
⑸高效液相色譜法
氨基糖苷類抗生素
雜環(huán)藥物
吡啶類藥物
異煙肼的鑒別試驗(yàn)：還原反應(yīng)。異煙肼的酰肼基有還原性，可還原硝酸銀中的Ag+成單質(zhì)銀，肼基則被氧化生成氮?dú)狻＜影敝葡跛徙y試液1ml，即產(chǎn)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。
縮合反應(yīng)。異煙肼的酰肼基可以和含羰基的試劑（如芳醛）發(fā)生縮合反應(yīng)。異煙肼與香草醛反應(yīng)，生成異煙腙，測(cè)定熔點(diǎn)供鑒別。
沉淀反應(yīng)。異煙肼分子中的吡啶環(huán)具有堿性，可以和重金屬鹽類（如氯化汞、硫酸銅、碘化鉍鉀）乙基苦味酸形成沉淀。異煙肼和氯化汞可生成白色沉淀。和硫酸銅-枸櫞酸試液反應(yīng)，先產(chǎn)生綠色沉淀，加熱，沉淀變?yōu)榧t棕色。
尼克剎米的鑒別：戊烯二醛反應(yīng)。屬吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng)。尼克剎米分子中的吡啶環(huán)與溴化氰反應(yīng)，開環(huán)形成戊烯二醛的衍生物，再與苯胺縮合，形成黃色的希夫氏堿。
異煙肼也可發(fā)生戊烯二醛反應(yīng)，但需先用高錳酸鉀或溴水氧化為異煙酸，再與溴化氰作用。
與苯胺縮合形成黃色至棕黃色產(chǎn)物，與聯(lián)苯胺紫外分光光度法形成淡紅至紅色產(chǎn)物。
水解反應(yīng)。尼克剎米分子中的酰胺基在堿性條件下可水解，加氫氧化鈉試液，加熱，即有二乙胺臭味逸出，能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變成藍(lán)色。
沉淀反應(yīng)。尼克剎米分子中的吡啶環(huán)也可以和重金屬離子反應(yīng)。尼克剎米和硫酸銅及硫氰酸銨作用，生成草綠色配位化合物的沉淀。
異煙肼中游離肼的檢查：薄層色譜法。肼的檢測(cè)限為0.1μg，控制限量為0.02%。
異煙肼的含量測(cè)定：異煙肼分子中的酰肼基具有還原性，可采用氧化還原滴定法測(cè)定其含量。溴酸鉀法。甲基橙作指示劑，溴酸鉀滴定止粉紅色消失。每1ml的溴酸鉀滴定液（0.1667mol/L）相當(dāng)于3.429mg的C6H7N3O。
異煙肼的片劑、注射劑均采用溴酸鉀法測(cè)定含量。
還可使用溴量法、剩余碘量法測(cè)定含量，也可用非水溶液滴定法。
尼克剎米含量測(cè)定：非水溶液滴定法。溶劑：冰醋酸，指示劑：結(jié)晶紫，滴定液：高氯酸。至溶液藍(lán)綠色。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于17.82mg的C10H14N2O。
紫外分光光度法。測(cè)定尼克剎米注射劑含量。注射劑的溶劑對(duì)非水溶液滴定法有干擾，所以采用本法。使用0.5%硫酸溶液溶解樣品，是為了使藥物呈離解狀態(tài)，易溶于水。
甾體激素類藥物
基本結(jié)構(gòu)：均具有環(huán)戊烷駢多氫菲母核。
分類：
1.腎上腺皮質(zhì)激素：皮質(zhì)酮衍生物，如可的松、潑尼松、地塞米松等。
本類藥物多為C21-羥基所形成的酯類。
結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是具有21個(gè)C原子：A環(huán)：具有Δ4-3-酮基；C17：具有α-醇酮基并多數(shù)有α-羥基；C10、C13：具有角甲基；C11：具有羥基或酮基；其它：有些皮質(zhì)激素具有Δ1,6α、9α鹵素，16α羥基，6α、12α、16α、16β甲基等。
2.雄性激素及蛋白同化激素：甲睪酮、丙酸睪酮、十一酸睪酮等；蛋白同化激素有苯丙酸諾龍。
結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：雄性激素具有19個(gè)C原子；蛋白同化激素具有18個(gè)C原子（C10上無角甲基）；A環(huán)：具有Δ4-3-酮基；C17：無側(cè)鏈，多數(shù)是一個(gè)β-羥基，有些是由他形成的酯，有些具有α-甲基。
3.孕激素：也稱為黃體酮激素或孕酮。典型藥物為黃體酮。
中國藥典收載有：黃體酮、醋酸甲羥孕酮、己酸羥孕酮、醋酸甲地孕酮原料及制劑；醋酸氯地孕酮原料等。
結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：具有21個(gè)C原子；A環(huán)：具有Δ4-3-酮基；C17：具有甲酮基，有些具有α-羥基，與醋酸、已酸等形成酯（如醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、己酸羥孕酮等）；其它：有些具有Δ6、6β-甲基、6α-甲基、6β-氯。
4.雌激素：又稱卵泡激素。雌二醇、炔雌醚、苯甲酸雌二醇、戊酸雌二醇、炔雌醇原料及制劑等。
結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：具有18個(gè)C原子；A環(huán)：為苯環(huán)，C3上具有酚羥基且有些形成了酯或醚；C10：無角甲基；C17：具有β-羥基或酮基，有些羥基形成了酯，還有些具有乙炔基。
口服避孕藥：炔諾酮、炔諾孕酮、炔孕酮。多數(shù)在A環(huán)上具有Δ4-3-酮基，與黃體酮和睪酮一致；有的在C17上具有β-羥基、α-乙炔基或甲酮基；有的在C10上無角甲基，與雌激素相同。
鑒別試驗(yàn)：
呈色反應(yīng)
1.與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng)：許多甾體激素能與硫酸、磷酸、高氯酸、鹽酸等呈色，其中與與硫酸的呈色反應(yīng)應(yīng)用較廣。
藥品名稱顏色熒光加水稀釋后的變化
醋酸可的松黃或微帶橙無顏色消失溶液澄清
氫化可的松棕黃至紅綠色黃至橙黃微帶綠色熒光，少量絮狀沉淀
潑尼松橙無黃至藍(lán)綠
潑尼松龍深紅無紅色消失，灰色絮狀沉淀
炔雌醇深紅黃綠
地塞米松磷酸鈉黃或紅棕?zé)o
某些甾體激素藥物與硫酸-乙醇或硫酸-甲醇作用而呈色。如甲睪酮：取本品數(shù)毫克，加硫酸-乙醇（2：1）1ml使溶解，即顯黃色并帶有黃綠色熒光。
2.官能團(tuán)的呈色反應(yīng)：
①C17-α-醇酮基的呈色反應(yīng)：皮質(zhì)激素類藥物分子結(jié)構(gòu)中C17位上的α-醇酮基具有還原性，能與氧化劑四氮唑鹽反應(yīng)而呈色。如醋酸潑尼松在堿性條件下與氯化三苯四氮唑試液反應(yīng)生成紅色。
②酮基的呈色反應(yīng)：甾體激素分子結(jié)構(gòu)中含有酮基，如C3-酮基和C20-酮基,均能與2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼等羰基試劑呈色。例如，醋酸可的松、氫化可的松等，其甲醇或乙醇溶液加新制的硫酸苯肼試液，加熱即顯黃色。
③甲酮基的呈色反應(yīng)：甾體激素分子結(jié)構(gòu)中含有甲酮基乙基活潑亞甲基時(shí)，能與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基酚、芳香醛類反應(yīng)呈色。其中亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)可認(rèn)為是黃體酮的靈敏、專屬的鑒別方法，在一定的條件下，黃體酮顯藍(lán)紫色，其他常用甾體激素均不顯藍(lán)紫色，而呈現(xiàn)淡橙色或不顯色。
④有機(jī)氟的呈色反應(yīng)：一些含氟的甾體激素藥物（如醋酸氟輕松、醋酸地塞米松等），經(jīng)氧瓶燃燒法后生成無機(jī)氟化物，在12%醋酸鈉的稀醋酸中與茜素氟藍(lán)及硝基亞鈰起反應(yīng)，即顯藍(lán)紫色。
⑤酚羥基的呈色反應(yīng)：C3為酚羥基的雌激素，能與重氮苯磺酸反應(yīng)生成紅色偶氮染料。如JP(13)收載的苯甲酸雌二醇利用該法進(jìn)行鑒別。
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