藥師指導(dǎo)：甾體激素類(lèi)藥物

甾體激素類(lèi)藥物基本結(jié)構(gòu)：均具有環(huán)戊烷駢多氫菲母核。
分類(lèi)：

1.腎上腺皮質(zhì)激素：皮質(zhì)酮衍生物，如可的松、潑尼松、地塞米松等。

本類(lèi)藥物多為C21-羥基所形成的酯類(lèi)。

結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是具有21個(gè)C原子：A環(huán)：具有Δ4-3-酮基；C17：具有α-醇酮基并多數(shù)有α-羥基；C10、C13：具有角甲基；C11：具有羥基或酮基；其它：有些皮質(zhì)激素具有Δ1，6α、9α鹵素，16α羥基，6α、12α、16α、16β甲基等。

2.雄性激素及蛋白同化激素：甲睪酮、丙酸睪酮、十一酸睪酮等；蛋白同化激素有苯丙酸諾龍。

結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：雄性激素具有19個(gè)C原子；蛋白同化激素具有18個(gè)C原子（C10上無(wú)角甲基）；A環(huán)：具有Δ4-3-酮基；C17：無(wú)側(cè)鏈，多數(shù)是一個(gè)β-羥基，有些是由他形成的酯，有些具有α-甲基。

3.孕激素：也稱(chēng)為黃體酮激素或孕酮。典型藥物為黃體酮。

中國(guó)藥典收載有：黃體酮、醋酸甲羥孕酮、己酸羥孕酮、醋酸甲地孕酮原料及制劑；醋酸氯地孕酮原料等。

結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：具有21個(gè)C原子；A環(huán)：具有Δ4-3-酮基；C17：具有甲酮基，有些具有α-羥基，與醋酸、已酸等形成酯（如醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、己酸羥孕酮等）；其它：有些具有Δ6、6β-甲基、6α-甲基、6β-氯。

4.雌激素：又稱(chēng)卵泡激素。雌二醇、炔雌醚、苯甲酸雌二醇、戊酸雌二醇、炔雌醇原料及制劑等。

結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：具有18個(gè)C原子；A環(huán)：為苯環(huán)，C3上具有酚羥基且有些形成了酯或醚；C10：無(wú)角甲基；C17：具有β-羥基或酮基，有些羥基形成了酯，還有些具有乙炔基。

口服避孕藥：炔諾酮、炔諾孕酮、炔孕酮。多數(shù)在A環(huán)上具有Δ4-3-酮基，與黃體酮和睪酮一致；有的在C17上具有β-羥基、α-乙炔基或甲酮基；有的在C10上無(wú)角甲基，與雌激素相同。

鑒別試驗(yàn)：

呈色反應(yīng)1.與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng)：許多甾體激素能與硫酸、磷酸、高氯酸、鹽酸等呈色，其中與與硫酸的呈色反應(yīng)應(yīng)用較廣。

藥品名稱(chēng) 顏色 熒光 加水稀釋后的變化醋酸可的松 黃或微帶橙 無(wú) 顏色消失溶液澄清氫化可的松 棕黃至紅 綠色 黃至橙黃微帶綠色熒光，少量絮狀沉淀潑尼松 橙 無(wú) 黃至藍(lán)綠潑尼松龍 深紅 無(wú) 紅色消失，灰色絮狀沉淀炔雌醇 深紅 黃綠地塞米松磷酸鈉 黃或紅棕 無(wú)某些甾體激素藥物與硫酸-乙醇或硫酸-甲醇作用而呈色。如甲睪酮：取本品數(shù)毫克，加硫酸-乙醇（2：1）1ml使溶解，即顯黃色并帶有黃綠色熒光。

2.官能團(tuán)的呈色反應(yīng)：

①C17-α-醇酮基的呈色反應(yīng)：皮質(zhì)激素類(lèi)藥物分子結(jié)構(gòu)中C17位上的α-醇酮基具有還原性，能與氧化劑四氮唑鹽反應(yīng)而呈色。如醋酸潑尼松在堿性條件下與氯化三苯四氮唑試液反應(yīng)生成紅色。

②酮基的呈色反應(yīng)：甾體激素分子結(jié)構(gòu)中含有酮基，如C3-酮基和C20-酮基，均能與2，4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼等羰基試劑呈色。例如，醋酸可的松、氫化可的松等，其甲醇或乙醇溶液加新制的硫酸苯肼試液，加熱即顯黃色。

③甲酮基的呈色反應(yīng)：甾體激素分子結(jié)構(gòu)中含有甲酮基乙基活潑亞甲基時(shí)，能與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基酚、芳香醛類(lèi)反應(yīng)呈色。其中亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)可認(rèn)為是黃體酮的靈敏、專(zhuān)屬的鑒別方法，在一定的條件下，黃體酮顯藍(lán)紫色，其他常用甾體激素均不顯藍(lán)紫色，而呈現(xiàn)淡橙色或不顯色。

④有機(jī)氟的呈色反應(yīng)：一些含氟的甾體激素藥物（如醋酸氟輕松、醋酸地塞米松等），經(jīng)氧瓶燃燒法后生成無(wú)機(jī)氟化物，在12%醋酸鈉的稀醋酸中與茜素氟藍(lán)及硝基亞鈰起反應(yīng)，即顯藍(lán)紫色。

⑤酚羥基的呈色反應(yīng)：C3為酚羥基的雌激素，能與重氮苯磺酸反應(yīng)生成紅色偶氮染料。如JP（13）收載的苯甲酸雌二醇利用該法進(jìn)行鑒別。
沉淀反應(yīng)1.與斐林試劑的沉淀反應(yīng)皮質(zhì)激素的C17-α-醇酮基具強(qiáng)還原作用，與斐林試劑反應(yīng)生成橙紅色氧化亞銅沉淀。
2.與氨制硝酸銀的沉淀反應(yīng)皮質(zhì)激素的C17-α-醇酮基具強(qiáng)還原性，與氨制硝酸銀反應(yīng)，生成黑色金屬銀沉淀。

3.與硝酸銀的沉淀反應(yīng)含炔基的甾體激素，如炔雌醇、炔諾酮，遇硝酸銀獎(jiǎng)試液，即生成白色的炔雌醇銀鹽沉淀及白色炔諾酮銀沉淀。

4.與硝酸—硝酸銀的沉淀反應(yīng)甾體激素（如丙酸氯貝他索、丙酸貝氯米松）中有機(jī)結(jié)合的氯，經(jīng)加熱或進(jìn)行有機(jī)破壞生成無(wú)機(jī)氯化物，再在硝酸酸性條件下與硝酸銀作用，生成氯化銀的白色沉淀。

制備衍生物測(cè)定其熔點(diǎn)利用甾醇、甾酮類(lèi)藥物與一些試劑反應(yīng)生成酯、肟、縮氨脲，或利用醇制堿液水解甾體酯類(lèi)生成相應(yīng)的母體，然后測(cè)定其熔點(diǎn)進(jìn)行鑒別。

1.酯的生成：如炔雌醇制成苯甲酸酯。

2.酮肟的生成：如黃體酮與鹽酸羥胺作用生成黃體酮雙酮肟為例。

3.縮氨基脲的生成：ChP收載苯丙酸諾龍生成其縮氨基脲衍生物。

4.酯的水解：如丙酸睪酮用醇制氫氧化鉀水解為例。

水解產(chǎn)物的反應(yīng)戊酸雌二醇、已酸羥孕酮等藥物，先在堿液中水解，經(jīng)酸化加熱分別產(chǎn)生戊酸、己酸特臭，用此法可鑒別這兩種藥物。

紫外分光光度法丙酸倍氯米松的乙醇溶液（20μg/ml）在239nm波長(zhǎng)處有最大吸收。

紅外分光光度法薄層色譜法中國(guó)藥典收載的炔諾酮、炔雌醚片、丙酸睪酮注射液、倍他米松磷酸鈉、醋酸氯地孕酮片、醋酸甲羥孕酮片、醋酸潑尼松片、苯丙酸諾龍注射液、戊酸雌二醇注射液、苯甲酸雌二醇注射液、復(fù)方己酸孕酮注射液、復(fù)方炔諾酮片、復(fù)方炔諾酮膜、復(fù)方炔諾孕酮片、復(fù)方炔諾孕酮滴丸、哈西奈德軟膏等甾體激素藥物均采用了薄層色譜（標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照法）進(jìn)行鑒別。

高效液相色譜法：

中國(guó)藥典中醋酸氟輕松軟膏、醋酸氟氫可的松軟膏、醋酸曲安奈德軟膏、丙酸倍氯米松軟膏、地塞米松磷酸鈉滴眼液、哈西奈德乳膏等的鑒別試驗(yàn)。

特殊雜質(zhì)的檢查1.游離磷酸：地塞米松磷酸鈉（中國(guó)藥典收載）、氫化可的松磷酸鈉中檢查游離磷酸。

高法系利用酸性溶液中磷酸與鉬酸作用生成磷鉬酸銨，再經(jīng)還原形成磷鉬酸藍(lán)（鉬藍(lán)），在740nm波長(zhǎng)處有最大吸收。

2.甲醇和丙酮：地塞米松磷酸鈉中檢查甲醇和丙酮。

本品在生產(chǎn)工藝中大量使用甲醇和丙酮，因此藥典規(guī)定作甲醇與丙酮?dú)埩袅繖z查。甲醇限量為3.1ng. 3.雌酮：炔雌醇中檢查雌酮。

本法系根據(jù)雌酮的Zimmermann反應(yīng)來(lái)檢查的。即在羰基的鄰位具有活潑亞甲基的化合物在堿性的氫氧化鉀乙醇溶液中，與間二硝基苯反應(yīng)呈紅～藍(lán)色。雌酮是17-酮甾類(lèi)，因此根據(jù)該反應(yīng)生成紫紅色化合物。在此操作中，如果不使用純度高的間二硝基苯，則呈褐色而難于判定。

4.硒中國(guó)藥典中規(guī)定醋酸地塞米松、醋酸氟輕松要檢查“硒”。其原理為在氧瓶燃燒破壞后的吸收液中加鹽酸羥胺，使Se6+還原為Se4+，在pH2.0±0.2的條件下與2.3-二氨基萘試液作用，生成4，5-苯丙苯硒二唑，用環(huán)己烷提取，于378nm波長(zhǎng)處呈最大吸收。

5.其他甾體① 薄層色譜法② 高效液相色譜法含量測(cè)定1.高效液相色譜法2.紫外分光光度法3.四氮唑比色法四氮唑鹽的種類(lèi)：①2，3，4-三苯基氯化四氮唑（TTC），也稱(chēng)紅四氮唑（RT），其還原產(chǎn)物為不溶于水的深紅色三苯甲zan②藍(lán)四氮唑（BT），即3，3‘-二甲氧苯基-雙-4，4’-（3，5-二苯基）氯化四氮唑，其還原產(chǎn)物為暗藍(lán)色的雙甲zan反應(yīng)原理：皮質(zhì)激素C17-α-醇酮基（-CO-CH2OH）具有還原性，在強(qiáng)堿性試液中能將四氮唑鹽定量地還原為有色甲zan.生成顏色隨所用試劑和條件的不同而定，多為紅色或藍(lán)色。

測(cè)定方法：中國(guó)藥典采用氯化三苯四氮唑法。

例如醋酸潑尼松龍軟膏的含量測(cè)定。

討論：

①基團(tuán)影響：C11-酮基的反應(yīng)速度快于C11-羥基甾體；C21-羥基酯化后較其母體羥基的反應(yīng)速度慢；當(dāng)酯化了的基團(tuán)為三甲基醋酸酯、磷酸酯或琥珀酸酯時(shí)，反應(yīng)更慢。

②溶劑和水分的影響：含水量大時(shí)會(huì)使呈色速度減慢，但含水量不超過(guò)5%時(shí)，對(duì)結(jié)果幾無(wú)影響，因此可采用95%乙醇。

③堿的種類(lèi)及加入順序的影響：在各類(lèi)堿中，采用氫氧化四甲基銨能得到滿意結(jié)果，故最為常用。以先加四氮唑鹽溶液再加堿液較好。

④空氣中氧及光線的影響：反應(yīng)及其產(chǎn)物對(duì)光敏感，故應(yīng)避光。

⑤溫度與時(shí)間的影響：一般室溫或30℃恒溫條件下顯色。中國(guó)藥典多數(shù)25℃暗處反應(yīng)40～45min. 4.異煙肼比色法甾體激素C3-酮基及某些其他位置上的酮基都能在酸性條件下與羰基試劑異煙肼縮合形成黃色異煙腙，在一定波長(zhǎng)下具有最大吸收。

某些具有兩個(gè)酮基的甾體激素可形成雙腙，如黃體酮、可的松和氫化可的松等。

本法主要用于甾體激素制劑的測(cè)定，如倍他米松軟膏、哈西奈德軟膏、倍他米松磷酸鈉及其注射液等的含量測(cè)定。

討論：①溶劑的選擇：只用用無(wú)水乙醇和無(wú)水甲醇才能得到滿意的結(jié)果，其他溶劑因受到異煙肼鹽酸鹽在其中溶解度的限制不能采用。

②酸的種類(lèi)和濃度以及異煙肼的濃度：當(dāng)酸與異煙肼試劑的摩爾比為2：1時(shí)可獲得最大吸收度。

③水分、溫度、光線和氧的影響：當(dāng)溶劑中含水量增高，吸收度隨之降低。溫度升高，反應(yīng)加速。當(dāng)在具塞玻管中不致使溶劑揮發(fā)及吸收水分的情況下，光與氧不影響反應(yīng)。

④關(guān)于反應(yīng)的專(zhuān)屬性：具有Δ4-3-酮基的甾體激素在室溫不到1h即可定量地與酸性異煙肼反應(yīng)。其他甾酮化合物需在長(zhǎng)時(shí)間放置或加熱后方可反應(yīng)完全，因此在上述反應(yīng)條件下，本法對(duì)Δ4-3-酮甾體具有一定的專(zhuān)屬性。
5.Kober反應(yīng)比色法Kober反應(yīng)是指雌激素與硫酸-乙醇共熱呈色，用水或稀硫酸稀釋后重新加熱發(fā)生顏色改變，并在515nm附近有最大吸收。
Kober反應(yīng)有兩步：①與硫酸-乙醇光熱產(chǎn)生黃色，在465nm處有最大吸收；②加水或稀硫酸稀釋?zhuān)�重新加熱顯桃紅色，在515nm處有最大吸收。

中國(guó)藥典采用本法測(cè)定炔雌醇片及復(fù)方炔諾孕酮片、復(fù)方炔諾孕酮滴丸、復(fù)方左炔諾孕酮滴丸中的炔雌醇的含量。

維生素類(lèi)藥物維生素A維生素A的結(jié)構(gòu)為具有一個(gè)共軛多烯側(cè)鏈的環(huán)己烯，因而具有許多立體異構(gòu)體。

天然維生素A主要是全反式維生素A.性質(zhì)：具紫外吸收，易氧化變質(zhì)，能與三氯化銻呈色，與氯仿、乙醚、環(huán)己烷或是由醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。

鑒別試驗(yàn)①三氯化銻反應(yīng)（Carr-price反應(yīng)）：維生素A在飽和無(wú)水三氯化銻的無(wú)醇氯仿溶液中，即顯藍(lán)色，漸變成紫紅色。

②紫外吸收光譜：維生素A分子中含有5個(gè)共軛雙鍵，其無(wú)水乙醇溶液在波長(zhǎng)326nm處有最大吸收。當(dāng)在演算催化下加熱，則發(fā)生去水反應(yīng)而生成脫水維生素A.后者比維生素A多一個(gè)共軛雙鍵，使其最大吸收峰紅移，同時(shí)在350～390nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)出現(xiàn)3個(gè)最大吸收峰。

③薄層色譜：以硅膠G為吸附劑，環(huán)己烷-乙醚（80：20）為流動(dòng)相。

含量測(cè)定：紫外分光光度法（三點(diǎn)校正法）

原理：本法是在三個(gè)波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，根據(jù)校正公式計(jì)算吸收度A校正值后，再計(jì)算含量，故本法亦稱(chēng)“三點(diǎn)校正法”。原理如下：

①雜質(zhì)的吸收在310～340nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長(zhǎng)的增大，吸收度變小。

②物質(zhì)對(duì)光的吸收具有加和性。

三點(diǎn)波長(zhǎng)的選擇法①第1點(diǎn)：選擇維生素A的最大吸收波長(zhǎng)（即λ1）。

②第2點(diǎn)和第3點(diǎn)：在最大吸收波長(zhǎng)的兩側(cè)各選一點(diǎn)（即λ2和λ3）。

等波長(zhǎng)差法：在λ1的左右各選一點(diǎn)為λ2和λ3，使λ3—λ1＝λ1—λ2.維生素A醋酸酯。

等吸收法：在λ1的左右各選一點(diǎn)為λ2和λ3，使Aλ2= Aλ3=6/7 Aλ1.維生素A醇。

③雜質(zhì)吸收：對(duì)維生素A的測(cè)定有影響的雜質(zhì)主要有：

維生素A2和維生素A3；維生素A的氧化產(chǎn)物（環(huán)氧化物、維生素A醛和維生素A酸）；維生素A在光照下產(chǎn)生的無(wú)生物活性的聚合物鯨醇；維生素A