中國幽門螺桿菌研究:胃上皮化生和幽門螺桿菌超威結(jié)構(gòu)的觀察

為研究和證實十二指腸胃上皮化生(GM)與幽門螺桿菌及（Hp)十二指腸潰瘍的發(fā)生之間關(guān)系作者進行了如下超顯微結(jié)構(gòu)的觀察，現(xiàn)報告如下。

1 材料和方法

1.1 材料 均為我院內(nèi)鏡檢查的患者，內(nèi)鏡檢查結(jié)合病理切片觀察嚴(yán)格選材，18例球部標(biāo)本，其中十二指腸潰（DU)13例，慢性十二指腸炎3例，正常十二指腸2例；1例竇部標(biāo)本（有活動性炎質(zhì))作透射電鏡觀察，8例球部標(biāo)本，包括DU5例，慢性十二指腸炎2例，正常十二指腸1例作掃描電鏡觀察。球部標(biāo)本一塊放入4%戊二醛固定液內(nèi)做電鏡觀察，另一塊放入10%福爾馬林液固定，作組織化學(xué)染色。

1.2 方法

1.2.2 透射電鏡觀察 采用日立牌H700型透射電鏡。標(biāo)本常規(guī)在4%戊醛內(nèi)固定和在1%四氧化鋨（OsO4)的1h后脫水，包埋，先制備1μm厚的半薄切片，1%NaOH溶于酒精作軟化劑，軟化樹脂20min至1h，常規(guī)HE染色后在光鏡下定位，制500nm超薄切片，醋酯雙氧鈉，檸檬酸鋁雙染色后電鏡觀察。

1.2.2 掃描電鏡觀察 為上述透射電鏡之掃描附件。固定同上；丙酮梯度脫水；醋酸異戊脂置換；CO₂臨界點干燥；立體顯微鏡下定位；離子噴鍍儀鍍鉑后觀察。

1.2.3 復(fù)染色方法 將數(shù)塊活檢標(biāo)本放入盛有1～2ml生理鹽水的無菌試管內(nèi)，以3000轉(zhuǎn)/分 轉(zhuǎn)速離心后取懸液，用Formvar-碳沫酮附上述懸液2min,1%～2%磷鎢酸水溶液（pH6.5～7.4)染色1min～2min后，立即在透射電鏡下觀察。

2 結(jié)果

用AB（pH2.5)/PAS染色，根據(jù)十二指腸絨毛上皮形態(tài)，分化程度將其分為正常、胃上皮化生（Ⅰ型-分ⅠA和ⅠB兩亞型和不表現(xiàn)明顯上皮化生（Ⅱ型無奇不有類，見表1。

A表現(xiàn)為絨毛萎縮、粘膜表面呈波浪狀，粘膜表層上皮完全由化生的胃表面粘液細胞（即GMC)組成。GMC胞漿內(nèi)含大量的PAS陽性物質(zhì)，化生區(qū)無杯狀細胞（圖略)。18例DU有6例呈gydjdsj.org.cn/shiti/ⅠA表現(xiàn)，內(nèi)鏡下大多有明顯潰瘍灶，邊緣有瘢痕組織形成，底部無明顯苔膜覆蓋，甚至潰瘍被瘢痕組織填平（即H期和S期)。ⅠB型表現(xiàn)為絨毛形狀在萎縮到正常之間，可見正常杯狀細胞和吸收細胞點綴在GGM之間，GMC胸漿內(nèi)只有少量的PAS陽性物質(zhì)（圖略)。10例DU和2例慢性十二指腸炎表現(xiàn)為ⅠB型改變，內(nèi)鏡下表現(xiàn)有明顯潰瘍灶及周邊明顯充血、水腫，底部有較厚的苔膜覆蓋（即A期)。Ⅱ型表現(xiàn)為杯狀細胞、吸收細胞和絨毛形狀正常，在吸收細胞胸漿內(nèi)見PAS陽性小滴，杯狀細胞數(shù)量可輕度增加。2例DU表現(xiàn)為Ⅱ型改變，內(nèi)鏡下表現(xiàn)粘膜明顯充血、水腫和滲出及淺表潰瘍的形成，為潰瘍早期階段。3例內(nèi)鏡下正常十二指腸粘膜組織學(xué)上亦正常。

表1 DU邊緣粘膜表面形態(tài)學(xué)分型

^△GMC：the metapiastic gastric surface mucus secreting cells

透射電鏡觀察，正常杯狀細胞游離面是由大量指狀微絨毛密集平行排列形成紋狀緣，微絨毛表面覆以質(zhì)膜及分支狀多糖-蛋白質(zhì)復(fù)全物（glycocaluyx,GX)，胞質(zhì)內(nèi)含有各種細胞器，如豐富的滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，許多粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，發(fā)達的高爾基復(fù)合體以及線粒體和溶酶體，胸質(zhì)內(nèi)無粘原顆粒。光鏡下表現(xiàn)為Ⅱ型的吸收細胞表面策絨毛排列紊亂、斷裂，相鄰微絨毛互相融合增寬，有時微絨毛受侵，在質(zhì)膜下僅見一個完整的微絨毛核心，微絨毛外層的多糖-蛋白質(zhì)復(fù)合物中斷、變薄甚至消失。胸漿內(nèi)無明顯粘原顆粒，細胞器形態(tài)及排列正常；ⅠB型的吸收細胞除表現(xiàn)為上述微絨毛改變外，胞漿內(nèi)見大小不等，分布不均和電子密度不同的粘原顆粒。細胞器萎縮，消失或被擠壓在胸漿兩側(cè)。在GMC之間可見到正常的杯狀細胞；ⅠA型吸收細胞除表現(xiàn)ⅠB型外，胞漿內(nèi)粘原顆粒更為密集、豐富，有時在細胞表面可見到粘液層。GMC形態(tài)與胃表面粘液柱門面細胞相似；掃描電鏡觀察，GM區(qū)表面絨毛萎縮，紊亂甚至平坦，表面粗糙呈顆粒狀。

3例DU邊緣粘膜組織和1例竇部組織光鏡下和電鏡下發(fā)現(xiàn)Hp。透射電鏡下，球部及竇部所見Hp形態(tài)特征相似，胞壁具有雙層膜結(jié)構(gòu)，在兩層膜間常見局部加寬，在菌體一端可www.med126.com見1～4條有鞘鞭毛，有時可見箍縮分裂相。Hp均局限在胃上皮化生區(qū)，與GMC膜間常以垂直方向的絲狀物相連，此絲狀物附著處及其附近微絨毛斷裂、消失或增寬，菌體周圍組織被溶解，并可見游離的細胞碎片、粘膜破壞，失去連續(xù)性等現(xiàn)象（圖略)。兩例DU邊緣活檢組織復(fù)染樣本中，1例檢出Hp，其形態(tài)特征與竇部檢出的Hp相似。

3 討論

十二指腸胃上皮化生（GM)是指十二指腸粘膜，特別是球部膜出現(xiàn)了胃粘膜表層粘液柱狀上皮細胞，化生區(qū)上皮細胞PAS反應(yīng)陽性。本文結(jié)果提示，GM主要發(fā)生在有明顯炎癥的球部，特點常見于DU邊緣部，正常十二指腸球部和十二指腸降段粘膜很少見。本文認(rèn)為，GM是DU的組織學(xué)特征，組織形態(tài)上表現(xiàn)為ⅠA、ⅠB和Ⅱ型的改變是粘膜表面上皮在向胃上皮化生過程中分化程度不同的結(jié)果，因而能客觀地反映潰瘍的進展程度和愈合程度。即Ⅱ型為粘膜遭受損害后潰瘍形成的早期階段；ⅠA型為潰瘍周圍陳舊的具有保護作用的愈合階段；而ⅠB型為介于Ⅱ型和ⅠA型潰瘍愈合過程中的中間階段，與Greogery的結(jié)果一致。部分無明顯潰瘍灶但有GM發(fā)生的十二指腸炎實際是DUⅡ型或ⅠB型階段，性質(zhì)不同于慢性十二指腸炎，治療應(yīng)按DU治療。

Patrick等的研究發(fā)現(xiàn)，十二指腸粘膜上皮的形態(tài)學(xué)改變（即GM)更容易發(fā)生在胃酸過多的病人中，即胃酸和GM的發(fā)生有關(guān)。本文結(jié)果顯示，十二指腸內(nèi)的幽門螺桿菌和胃竇部中的幽門螺桿菌形態(tài)特征相似，與馮瑞娥等用透射電鏡觀察到的Hp和胃粘膜上皮細胞間的連接方式和細菌的形態(tài)特征相同。Hp通過特殊的絲狀物與GM細胞相連，并觀察到Hp可損害十二指腸粘膜，可能是直接或是其分泌的蛋白水解酶等作用的結(jié)果。認(rèn)為Hp是DU的致病細菌，同時發(fā)現(xiàn)組織學(xué)上有GM的DU并非均有Hp感染，說明Hp僅僅是引起DU的原因之一，DU發(fā)病的原因是胃酸和Hp共同作用的結(jié)果，即在胃酸的作用下，十二指腸發(fā)生胃上皮化生為Hp提供了感染條件，Hp的感染可能加速了潰瘍的形成，并可能影響潰瘍的愈合和預(yù)后。因此，對DU的治療應(yīng)該是以抑制胃酸分泌和中和胃酸為主，輔以抗菌藥物治療，可以達到促進潰瘍愈合和預(yù)防復(fù)發(fā)和目的。