本品系卡介菌經(jīng)培育后凍干制成。用于預(yù)防結(jié)核病。
1 菌種
1.1 制造卡介苗的菌種，應(yīng)由中國(guó)藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同意。嚴(yán)禁使用通過(guò)動(dòng)物的菌種制造卡介苗。
1.2 如果采用次代種子批，單批收獲培養(yǎng)物的總代數(shù)不得超過(guò)12代（包括在馬鈴薯培養(yǎng)基上培育的代數(shù)與在液體蘇通培養(yǎng)基上的代數(shù))。
1.3 菌種檢定
新收到的菌種或新制備種子批應(yīng)進(jìn)行下列檢定。
1.3.1 培養(yǎng)特性
卡介菌在蘇通培養(yǎng)基上發(fā)育良好。培育溫度在37～39℃之間。抗酸染色應(yīng)為抗酸桿菌。在蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基上發(fā)育的卡介菌應(yīng)是干皺成團(tuán)略呈淺黃色。在牛膽汁馬鈴薯培養(yǎng)基上為淺灰色粘膏狀菌苔。在雞蛋培養(yǎng)基上有突起的皺型和擴(kuò)散型兩類菌落，且?guī)\黃色。在蘇通培養(yǎng)基上卡介菌應(yīng)浮于表面，為多皺微帶黃色的菌膜。
1.3.2毒力試驗(yàn)
用結(jié)素試驗(yàn)（PPD 100IU)陰性，體重300～400g的同性健康豚鼠4只，各腹腔注射1ml菌液（5mg/ml)，每周稱體重，4～5周后解剖檢查，大網(wǎng)膜上可出現(xiàn)膿皰，腸系膜淋巴結(jié)及脾可能腫大，肝及其他臟器應(yīng)無(wú)肉眼可見(jiàn)的病變。
1.3.3 毒力試驗(yàn)
用結(jié)素試驗(yàn)（PPD 100IU)陰性，體重300～400g的同性健康豚鼠6只，于肌內(nèi)側(cè)皮下各注射1ml菌液（10mg/ml)，注射前稱體重，注射后每周觀察1次注射部位及局部淋巴結(jié)的變化。每2周稱體重1次。6周時(shí)解剖3只，滿3個(gè)月將另3只豚鼠解劑，檢查各臟器應(yīng)無(wú)肉眼可見(jiàn)的結(jié)核病變。若有可疑病灶時(shí)，應(yīng)作涂片和組織切片檢查，并采取部分病灶磨碎，加少量生理鹽水混勻，皮下注射2只豚鼠。若證明系結(jié)核病變，該菌種即應(yīng)廢棄。試驗(yàn)經(jīng)過(guò)詳細(xì)記錄備查。若未滿3個(gè)月試驗(yàn)豚鼠因其他病患死亡應(yīng)解剖檢查，依上法處理。若死亡2只以上應(yīng)重試。
1.3.4免疫力試驗(yàn)
用原代種子批以1/100人份的劑量免疫豚鼠，以103～104強(qiáng)毒人型結(jié)核分枝桿菌感染，免疫組與對(duì)照組動(dòng)物的病變指數(shù)及脾臟毒菌分離數(shù)的對(duì)數(shù)值經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，應(yīng)有顯著差異。如無(wú)條件，gydjdsj.org.cn/wszg/可送中國(guó)藥品生物制品檢定所進(jìn)行。
1.4 菌種保存
凍干菌種保存于2～8℃。
2 菌苗制造
2.1 卡介苗制造室必須與其他生物制品部門(mén)及實(shí)驗(yàn)室分開(kāi)。所需用具如高壓鍋、冰箱及玻璃器皿等，均須單獨(dú)設(shè)置并專用。卡介苗制造、包裝及保存過(guò)程均須避光。
卡介苗制造的工作人員及經(jīng)常進(jìn)入卡介苗制造室的人員，必須身體健康，經(jīng)X線檢查無(wú)結(jié)核病，且以后每年經(jīng)X線檢查1～2次，可疑者暫不在卡介苗制造室工作，其檢查記錄必須保存?zhèn)洳椤?/p>
2.2制造用培養(yǎng)基
生產(chǎn)用培養(yǎng)基不得含有能使人產(chǎn)生毒性或變態(tài)反應(yīng)的物質(zhì)。培養(yǎng)基所用的原料應(yīng)符合《中國(guó)生物制品主要原材料試行標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定。
2.3 菌種傳代與培養(yǎng)
凍干菌種在蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基、膽汁馬鈴薯培養(yǎng)基以及液體蘇通培養(yǎng)基上每傳一次為一代。馬鈴薯培養(yǎng)基上培育的菌種放冰箱保存不超過(guò)2個(gè)月。用于生產(chǎn)菌苗的培養(yǎng)物的總代數(shù)不超過(guò)12代。
2.4 原液制造
2.4.1 收集
培養(yǎng)瓶應(yīng)逐瓶檢查，若有污染、濕膜、混濁等情況應(yīng)廢棄。收集菌膜壓干，移入盛有不銹鋼珠瓶?jī)?nèi)，鋼珠與菌體的比例應(yīng)根據(jù)研磨機(jī)轉(zhuǎn)速控制在一適宜的范圍，并盡可能在低溫下研磨。加入適量無(wú)致敏原保護(hù)液稀釋成一定濃度的原液。
2.4.2 稀釋
用中國(guó)藥品生物制品檢定所發(fā)給的凍干卡介苗參考比濁標(biāo)準(zhǔn)，以分光光度法或其他適宜方法測(cè)定原液濃度，用保護(hù)液將原液稀釋成1.0mg/ml。
2.4.3 純菌試驗(yàn)
用于制造卡介苗的培養(yǎng)物、原液、以及稀釋后的菌苗均應(yīng)按《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》抽樣做純菌試驗(yàn)。
2.5 菌苗分批
用同一代菌種同時(shí)制造的菌苗為1批，稀釋為數(shù)瓶者，按瓶分亞批。
2.6 分裝
分裝過(guò)程中勿使苗混合均勻。每10人份卡介苗應(yīng)為0.5±0.1mg。
3 凍干
菌苗原液分裝后應(yīng)立即進(jìn)行凍干。干燥完畢后立即進(jìn)行真空封口。亦可充氮封口。
4 成品檢定
4.1 物理化學(xué)檢查
凍干卡介苗應(yīng)為白色疏松體或粉末狀。加入稀釋液后，應(yīng)于3分鐘內(nèi)完www.med126.com全溶解成均勻懸液。殘余水分不應(yīng)超過(guò)3%。包裝前應(yīng)每支安瓿檢查真空，不合格的安瓿應(yīng)廢棄。
4.2 鑒別試驗(yàn)
每批菌苗須做涂片檢查，抗酸染色應(yīng)是抗酸桿菌。
4.3 純菌試驗(yàn)
每亞批菌苗抽樣按《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
4.4 活菌計(jì)數(shù)
同一代菌種制造的各批凍干卡介苗應(yīng)抽1批做干前活菌計(jì)數(shù)。同一批菌種制造的各亞批菌苗均應(yīng)做干后活菌計(jì)數(shù)，抽安瓿5支稀釋混合。凍干菌苗活菌數(shù)應(yīng)在100萬(wàn)/mg以上�？膳c熱穩(wěn)定性試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行。
4.5 熱穩(wěn)定性試驗(yàn)
取凍干后菌苗放置37℃28天進(jìn)行加速失活試驗(yàn)，測(cè)定活菌數(shù)，與4℃保存的同一批菌苗同時(shí)進(jìn)行比較，計(jì)算降低的百分離。加溫放置制品的活菌數(shù)應(yīng)不少于冷藏菌苗的2%，但不得低于20萬(wàn)/mg。此試驗(yàn)可與參考菌苗同時(shí)進(jìn)行（參考菌苗加入試驗(yàn)的目的為檢查培養(yǎng)基的質(zhì)量)。每一機(jī)柜凍干菌勒應(yīng)抽樣進(jìn)行此項(xiàng)試驗(yàn)。
4.6 安全試驗(yàn)
同一代菌種生產(chǎn)的各批凍干卡介苗應(yīng)抽1個(gè)亞批做安全試驗(yàn)。用結(jié)素試驗(yàn)（PPd 10IU)陰性，體重300～400g的同性健康豚鼠6只。每只皮下注射相當(dāng)于50人份的凍干皮內(nèi)注射用卡介苗，每2周稱重一次，觀察6周后，解剖檢查每只動(dòng)物，若肝、脾、肺等臟器無(wú)結(jié)核病變，該批菌苗即可發(fā)出使用。若有可疑病灶時(shí)，應(yīng)按1.3.3項(xiàng)處理。
5 保存與效期
保存于2～8℃暗處。自首次活菌計(jì)數(shù)結(jié)束之日起效期為1年。
