本規(guī)程適用于白喉、破傷風(fēng)、氣性壞疽及肉毒四種精制抗毒素。
精制白喉、破傷風(fēng)、氣性壞疽、肉毒抗毒素系分別由各該抗毒素的馬血漿經(jīng)胃酶消化后用硫酸銨鹽析法制得的液體或凍干抗毒素球蛋白制劑。分別用于各該疾病的預(yù)防和治療。
1 制造
1.1對血漿的要求
1.1.1制造精制抗毒素的血漿，應(yīng)符合附錄1《抗毒素生產(chǎn)用馬匹免疫方法》的規(guī)定。在保存期間如發(fā)一周明顯的溶血、染菌及其他異常現(xiàn)象，不得投入生產(chǎn)。
1.1.2血漿的抗毒素效價不得低于下列要求：
血漿種類每瓶血漿效價（IU/ml)
白喉1000
破傷風(fēng)1000
威氏250
膿毒300
水腫550
溶組織550
A型肉毒1000
B型肉毒600
E型肉毒600
以上效價均以動物測定方法為準。
1.2制造程序
1.2.1消化
1.2.1.1第1法
血漿用2～4倍水稀釋，調(diào)節(jié)pH至3.2～3.6，加入胃酶適量及甲苯0.2%～0.4%（ml/ml)，于29～31℃消化1～1.5小時。
1.2.1.2第2法
血漿用2～4倍水稀釋，調(diào)節(jié)pH至3.6～4.0，加入胃酶適量及甲苯0.2%～0.4%（ml/ml)，于22±℃消化20～22小時。
1.2.2第1次沉淀及加熱處理。
每100ml消化液加硫酸銨14～16g，白喉及破傷風(fēng)抗毒素調(diào)節(jié)pH至4.8～5.6，氣性壞疽及肉毒抗毒素調(diào)節(jié)pH至4.5～5.0；白喉、破傷風(fēng)、氣性壞疽抗毒素加溫至57～57℃，肉毒抗毒素加溫至50～52℃，均保持30分鐘。加溫終了，盡速降溫至45℃以下，分離，取清液。
1.2.3第2次沉淀
上述清液調(diào)節(jié)pH至7.0～7.4，每100ml加硫酸銨19～21g，分離，取沉淀，壓干。
上述沉淀用水稀釋至蛋白含量不超過2%（g/ml)，加明礬不少于0.8%(g/ml)，調(diào)節(jié)pH至7.7～7.9，分離，取清液。
1.2.5濃縮
1.2.5.1第1法
將上述清液第100ml加硫酸銨38g，分離，取沉淀，壓干。沉淀物透析至硫酸銨含量0.1%（g/ml)以下。
1.2.5.2第2法
將上述清液混合，通過超濾裝置進行超濾，濃縮至硫酸銨含量為0.1%（g/ml)以下。
1.2.6最后處理
上述透析后的血清進行下列處理：
1.2.6.1調(diào)整固體總量不超過20%（g/ml)。蛋白含量不超過17%（g/ml)。
1.2.6.2加氯化鈉使最終含量為0.9%（g/ml)。
1.2.6.3加三氯甲烷使最終含量為0.5%（ml/ml)或硫柳汞液使最終含量為0.01%(g/ml)為防腐劑。用于制造凍干抗毒素者只用三氯甲烷為防腐劑。
1.2.6.4調(diào)節(jié)pH至6.0～7.0。
1.2.6.5除菌過濾，并做無菌試驗。
1.2.7凍干
經(jīng)除菌過濾及半成品檢定合格的精制抗毒素，可用凍干法制成干燥制品。
1.3對制造工藝的要求及規(guī)定
1.3.1制造室內(nèi)部裝修材料應(yīng)便于清潔消毒，地面耐腐蝕，室內(nèi)盡可能低溫，力爭做到無菌操作。
1.3.2所用儀表和量具應(yīng)精密準確，并經(jīng)常校正。一切與血漿接觸的器皿、用具等，應(yīng)注意不染有熱原質(zhì)，不含有毒物物質(zhì)。消化液加熱處理前后的器皿、用具須嚴格處理。未經(jīng)處理的器皿、用具不得用于不同批。
1.3.3所用化學(xué)原料的規(guī)格應(yīng)不低于化學(xué)純（三級純)或符合《中國生物制品主要原材料試行標準》規(guī)定。胃酶應(yīng)力求活力高，粘液素含量少，類A血型物質(zhì)含量低，并經(jīng)過活力單位及類A血型物質(zhì)含量測定。制造用水，應(yīng)采取有效措施防止污染或產(chǎn)生熱原質(zhì)。
1.3.4抗毒素精制的每步操作均應(yīng)盡量除凈非抗毒素蛋白質(zhì)，以提高制品純度。
1.3.5制造過程中加酸、堿及硫酸銨等時，速度不宜過快，避免局部濃度過高；酸、堿原液嘗試不宜超過2mol/L。操作時應(yīng)盡量避免產(chǎn)生大量泡沫。應(yīng)采取有效措施防止染菌和產(chǎn)生熱原質(zhì)。除必要的操作時間外，應(yīng)盡量縮短生產(chǎn)周期。
1.3.6制造過程中必須嚴格執(zhí)行《生物制品分批規(guī)程》，不得將中間回收品并入不同批內(nèi)。制造批號不同但制造方法與所含防腐劑相同并經(jīng)檢定（無菌試驗、安全試驗、熱原質(zhì)試驗)合格的半成品可進行合并，但合并批數(shù)不得超過2批。多價制品，其各單價半成品合并時，亦應(yīng)符合上述原則。
1.3.7關(guān)于精制抗毒素再制的規(guī)定
1.3.7.1凡屬下列范圍的半成品及成品，可予再制。
（1)熱原質(zhì)試驗結(jié)果陽性者。
（2)非肉眼可見而通過無菌試驗發(fā)現(xiàn)的染菌，經(jīng)過濾不能除菌者。
（3)理化檢定不合格者。
（4)成品裝量不足者。
（5)超過效期的庫存制品。
（6)種類及制造方法相同，批號及數(shù)量清楚的分裝檢損品及濾器沖洗液可合并再制（但該批再制品的分裝檢損品應(yīng)予廢棄)。
1.3.7.2再制方法可根據(jù)具體情況制定，但制成后的質(zhì)量必須符合檢定要求。
1.3.8多價氣性壞疽抗毒素按下列單位比例進行混合。
威氏：水腫：膿毒=2∶2∶1。
必要時可加入1份溶組織抗毒素。
1.3.9制成之精制抗毒素，須在冷暗處保存至少1個月作為穩(wěn)定期。
1.4半成品檢定
由制造部門進行理化檢定、無菌試驗、安全試驗、熱原質(zhì)試驗、類A血型物質(zhì)測定及效價測定。效價測定、類A血型物質(zhì)測定及熱原質(zhì)試驗可與質(zhì)量檢定部門會同進行。檢定方法及要求同成品檢定。
2 成品檢定
由質(zhì)量檢定部門進行全面檢定，半成品已會同檢定的項目可抽檢。
2.1鑒別試驗
每批成品至少抽取一瓶作以下鑒別試驗：
2.1.1作動物中和試驗（同效價測定)或免疫擴散試驗，以驗證本品系瓶簽標示的抗毒素。
2.1.2用兔抗馬血漿的兔Igg 與本品作免疫擴散試驗，以驗證本品為馬血清蛋白成分（如同一制造室無其他動物免疫血清生產(chǎn)，本試驗可免做)。
2.2理化檢定
2.2.1外觀
液體精制抗毒素應(yīng)為幾乎無色或淡黃色的澄明液體，不得含有渣粒或異物，長期貯存后可有微量能搖散的沉淀產(chǎn)生。除血清本身及防腐劑的特有氣味外，不得有其他氣味。凍干精制抗毒素應(yīng)為白色或微帶粉紅色的疏松體，加入規(guī)定量蒸餾水后輕輕搖動，應(yīng)于15分鐘內(nèi)完全溶解。溶解后的外觀應(yīng)與液體精制抗毒素相同。
2.2.2固體總量及蛋白含量
液體精制抗毒素以及凍干制品的安規(guī)定量溶解后，固體總量不得超過20%（g/ml)。蛋白含量不得超過17%（g/ml)。
2.2.3pH值應(yīng)為6.0～7.0。
2.2.4氯化鈉含量應(yīng)為0.85%～0.95%(g/ml)。
2.2.5硫酸銨含量
液體精制抗毒素以及凍干制品按規(guī)定量溶解后，均不得超過0.1%（g/ml)。
2.2.6液體精制抗毒素的防腐劑，用三氯甲烷者不得超過0.5%gydjdsj.org.cn/wszg/（mlg/ml)，用硫柳汞者不得超過0.01%（g/ml)。
2.2.7凍干gydjdsj.org.cn精制抗毒素水分含量不得超過3%。
2.2.8電泳檢查
將樣品稀釋至2%蛋白濃度，做瓊脂糖電泳分析，應(yīng)不含或僅含痕量白蛋白遷移率的蛋白。
2.2.9F（ab)2含量
用SDS-PAGE法（見《生物制品化學(xué)檢定規(guī)程》)測定，預(yù)防用抗毒素的F（ab)2含量不得低于50%，治療用抗毒素的F（ab)2含量不得低于60%。
2.3無菌試驗
按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。
2.4安全試驗
取體重300～400g豚鼠2只，每只皮下注射精制抗毒素5ml，于第3至5日觀察局部，除輕度紅腫外，應(yīng)無膿腫及壞死；第7日局部反應(yīng)應(yīng)消失，且體重不輕于注射前，如體重有輕微下降，可繼續(xù)觀察3日，如體重上升且高于注射前，可判為合格。
2.5熱原質(zhì)試驗
按《生物制品熱原質(zhì)試驗規(guī)程》進行，注射劑量為3ml/kg。判定標準按該4.1項要求進行。
2.6類A血型物質(zhì)含量。
用血凝抑制法（附錄6)測定，類A血型物質(zhì)不得超過4μg/ml。
2.7效價測定
2.7.1效價測定用標準抗毒素及試驗毒素由中國藥品生物制品檢定所統(tǒng)一定期分發(fā)。
2.7.2各種抗毒素的效價測定分別按附錄2～5進行。
2.7.3對各種抗毒素成品（凍干制品系按規(guī)定溶解后)的最低效價要求如下：
抗毒素種類IU/ml IU/gp
白喉預(yù)防用：2000 30000
治療用：3000 40000
破傷風(fēng)預(yù)防用：2000 35000
治療用：3000 45000
氣性壞疽（多價)1000
氣性壞疽（威氏)1000 8000
氣性壞疽（膿毒)1500 12500
氣性壞疽（水腫)2500 20000
氣性壞疽（溶組織)2500 20000
A型肉毒3000 20000
B型肉毒3000 20000
E型肉毒3000 20000
3 保存
應(yīng)保存在2～8℃冷暗干燥處。
4 效期
自效價測定合格之日起，精制抗毒素裝20%（不得低于16%)超量者，液體制品效期為5年，凍干制品效期為7年；裝10%（不得低于8%)超量者，液體制品效期為3年，凍干制品效期為5年。
