本品系用帶有人α2a型干擾素基因重組質(zhì)粒的大腸桿菌，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)及單克隆抗體親和層析后精制而成。用于治療某些病毒性疾病及部分腫瘤疾病。
1 菌種
1.1菌種來源
基因工程α2a干擾素工程菌由帶有人α2a干擾素基因的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌而來。投產(chǎn)的工程菌需經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)。
1.2菌種特性
菌種表達(dá)穩(wěn)定，表達(dá)水平符合投產(chǎn)菌種要求。
1.3制造用菌種庫的建立
從原始菌種庫傳出，經(jīng)擴(kuò)大后凍干保存，或由上一代制造用菌種庫傳出，擴(kuò)大后凍干保存作為制造用菌種庫，但每次只限傳三代。每批制造用菌種庫均進(jìn)行下列檢定，合格后方可投產(chǎn)。
1.3.1劃種LB瓊脂平板
應(yīng)呈典型大腸桿菌集落形態(tài)，無其他雜菌生長。
1.3.2涂片革蘭氏染色
在光學(xué)顯微鏡下觀察，應(yīng)為典型的革蘭氏陰性桿菌。
1.3.3對抗生素的抗性
應(yīng)與原始菌株相符。
1.3.4電鏡檢查
應(yīng)為典型大腸桿菌形態(tài)，并證明無支原體、病毒樣顆粒及其他微生物污染。
1.3.5生化反應(yīng)
應(yīng)符合大腸桿菌生物學(xué)性狀。
1.3.6干擾素的表達(dá)量
在搖床培養(yǎng)，應(yīng)符合原始菌種的表達(dá)量。
1.3.7質(zhì)粒檢查
應(yīng)做該質(zhì)粒的酶切圖譜，并應(yīng)與原始質(zhì)粒相符。
1.3.8表達(dá)的干擾素型別
應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)抗α干擾素血清做中和試驗(yàn)，證明型別正確。
1.4生產(chǎn)菌種
從制造用菌種庫傳出供生產(chǎn)用的菌種，稱為生產(chǎn)菌種。
1.4.1生產(chǎn)菌種的制備及檢定
取制造用菌種庫凍干菌種開啟后劃種LB平板2～3塊，培養(yǎng)后挑取平板中5～10個(gè)菌落，分別培養(yǎng)后保存，然后每個(gè)菌落分別進(jìn)行干擾素表達(dá)量測定，至少重復(fù)一次，選出其中干擾素表達(dá)量最高的一份，供生產(chǎn)制備種子液用，其表達(dá)量應(yīng)符合原始菌種的表達(dá)量。
1.5種子液
從生產(chǎn)菌種選出的菌種供做發(fā)酵用的稱“種子液”。種子液的制備：將1.4.1項(xiàng)檢定合格的生產(chǎn)菌種，根據(jù)實(shí)際需要做擴(kuò)充傳代，作為罐培養(yǎng)的種子液。
2 發(fā)酵培養(yǎng)
2.1空罐滅菌和實(shí)罐滅菌嚴(yán)格按照使用說明書要求操作。
2.2發(fā)酵培養(yǎng)基
應(yīng)為適于發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基，根據(jù)菌種的抗生素抗性，培養(yǎng)若中允許加入少量抗生素，但應(yīng)盡量避免含有β椖邗０防囁股亍?/P>
2.3發(fā)酵培養(yǎng)參數(shù)
根據(jù)工程菌和發(fā)酵工藝要求設(shè)置和變換各項(xiàng)培養(yǎng)參數(shù)。
3 收集菌體
用離心法或其他適宜方法收集菌體，菌體可在?/FONT>20℃下保存1年。
4 菌體裂解
用鹽酸胍或溶菌酶或高壓勻漿泵等適宜方法裂解菌體。
5 制備粗制干擾素
菌體裂解后經(jīng)離心所得上清液即為粗制干擾素。
6 純化
粗制干擾素經(jīng)單克隆抗體親和層析等純化步驟后即精制成“干擾素半成品原液”。
7 加白蛋白
取干擾素半成品原液檢定合格后，立即另入適量人白蛋白保護(hù)劑，即為“加人白蛋白半成品”，保存于?/FONT>30℃。
8 稀釋、除菌過濾
將“加人白蛋白半成品”用無熱原生理鹽水稀釋至所需濃度，補(bǔ)加人白蛋白，使最終含量1%～2%。然后用0.22μm孔徑濾膜除菌，除菌后抽樣進(jìn)行干擾素效價(jià)測定，熱原質(zhì)試驗(yàn)和無菌試驗(yàn)，合格后進(jìn)行分裝凍干。
9 分裝、凍干
9.1 每支安瓿分裝1ml，內(nèi)含α2a干擾素100或300萬IU。
9.2 凍干過程制品溫度不得超過33℃。
9.3 凍干后成品置10℃以下干燥處保存，成品檢定合格后進(jìn)行包裝。
10 半成品檢定
每批半成品抽樣進(jìn)行10.1～10.8項(xiàng)檢定。啟開新菌種生產(chǎn)的前3批或生產(chǎn)條件有較大改變時(shí)進(jìn)行10.9～10.12項(xiàng)檢定。
10.1 效價(jià)測定
用細(xì)胞病變抑制法，Wish細(xì)胞/VSV為基本檢測系統(tǒng)，用國家參考品校準(zhǔn)為IU。
10.2 蛋白含量
用Lowry法測定。
10.3 比活性
應(yīng)≥108Iumg蛋白。
10.4 純度
10.4.1 電泳純度
用非還原型SDS?/FONT>PAGE法，加樣量不低于5μg，經(jīng)掃描儀掃描純度應(yīng)在95%以上，聚合體不得超過10%。
10.4.2 高效液相色譜純度
用280nm檢測，應(yīng)是一個(gè)吸收峰或主峰占總面積95%以上。
10.5 分子量
用還原型SDS?/FONT>PAGE法，加樣量不低于5μg，α2a干擾素分子量應(yīng)為19KD±10%。
10.6 殘余外源性DNA含量
用同位素或生物素標(biāo)記探針法測定，每劑gydjdsj.org.cn/wsj/量中殘余外源性DNA應(yīng)低于100pg。
10.7 殘余鼠IgG含量
用酶標(biāo)或其他敏感方法測定，每劑量（20μg)的鼠IgG含量應(yīng)在100ng以下。
10.8 殘余工程菌蛋白含量
用酶標(biāo)或其他敏感方法測定，殘余工程菌蛋白不得超過總蛋白的0.02%。
10.9 殘留抗生素活性
半成品中不應(yīng)有殘余抗生素活性存在。
10.10 肽圖測定
應(yīng)符合α2a型干擾素圖形，批與批之間圖形應(yīng)一致。
10.11 等電聚集
測定等電點(diǎn)，α2a型干擾素等電點(diǎn)應(yīng)5.7～6.7范圍內(nèi)。
10.12 紫外光譜掃描
檢查半成品的吸收光譜，批與批之間應(yīng)一致，α2a干擾素的最大吸收光譜應(yīng)為280±3nm。
11 除菌半成品檢定
11.1 效價(jià)測定
同10.1項(xiàng)。
11.2 無菌試驗(yàn)
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
11.3 熱原質(zhì)試驗(yàn)
按《生物制品熱原質(zhì)試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行，注射劑量按家兔體重注射20萬IU/kg，判定標(biāo)準(zhǔn)按該規(guī)程4.1項(xiàng)要求進(jìn)行。
12 成品檢定
12.1 外觀
應(yīng)為白色或微黃色疏松體，另入1ml滅菌注射用水溶解后，不得含有肉www.med126.com眼可見的不溶物。
12.2 pH值
pH值應(yīng)為6.5～7.5。
12.3 效價(jià)測定
同10.1項(xiàng)。其效價(jià)應(yīng)為標(biāo)示量的80%～150%。
12.4 水分含量
應(yīng)≤3%（g/g)。
12.5 鑒別試驗(yàn)
用中和試驗(yàn)法，其抗病毒活性能被抗α2a型干擾素血清所中和或用免疫印染法。
12.6 HBsAg檢測
用敏感度為1ng/ml以下的試劑盒測定，應(yīng)為陰性。
12.7 無菌試驗(yàn)
同11.2項(xiàng)，每批抽樣不少于10支。
12.8 熱原質(zhì)試驗(yàn)
同11.3項(xiàng)。
安全試驗(yàn)
12.9.1 豚鼠試驗(yàn)
用體重300～400g豚鼠2只，每只腹側(cè)皮下注射干擾素1ml，觀察7天，局部無紅腫、壞死、體重增加者為合格。
12.9.2 小白鼠試驗(yàn)
用體重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射干擾素0.5ml，觀察7天，動(dòng)物全部存活，每只體重增加判為合格。
13 保存與效期
保存于10℃以下干燥處。自效價(jià)檢定合格之日起效期為2年6個(gè)月。
